Разумова мария: Мария Разумова | Forbes.ru

Гинеколог Разумова Мария Вадимовна


Направление деятельности
  • малые оперативные вмешательства для лечения гинекологических заболеваний (патология эндометрия, субмукозная форма миомы матки),
  • урогинекология,
  • гинекологические вмешательства лапароскопическим, влагалищным и открытым доступом.
Врачебная деятельность: 
  • С 2014 года по настоящее время — Врач акушер-гинеколог отделения гинекологии.


Образование
  • 2012-2014 гг. — Клиническая ординатура по специальности «Акушерство и гинекология» ФГБУ «НМХЦ им. Н. И. Пирогова» Минздрава России. 
  • 2006 -2012 гг. — Высшее профессиональное образование: Северо-Западный государственный медицинский университет им. И. И. Мечникова. Квалификация: врач. Специальность: лечебное дело.
Повышение квалификации
  • 2015 г. — Репродуктивный потенциал России (г. Санкт-Петербург).
  • 2014 г. — Комплексный подход к ведению пациенток с бесплодием и привычным невынашиванием.
  • 2014 г. — «Женское здоровье от менархе до менопаузы» (г. Санкт-Петербург).
  • 2013 г. — «Рациональная гормональная терапия в практике акушера-гинеколога» (г. Санкт-Петербург).
Сертификат
  • Акушерство и гинекология. Годен до 28.09.2024. Выдан: Частное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Высшая школа медицины «Эко-безопасность».

Участие в конференциях
  • 2013 г. — Всероссийская научно-практическая конференция «Патология гемостаза — общеклиническая проблема» (г. Санкт-Петербург). 
  • 2013 г. — Репродуктивный потенциал России  (г. Санкт-Петербург).

Разумова Мария Юрьевна

ФИО Недвижимость Транспорт Доход
Тип Площадь Владение
Разумова Мария Юрьевна земельный (под садово-огородническое использование и дачное хозяйство) 984 кв.м. В собственности

4 678 283 рубля

участок квартира (долевая, доля в праве 1/4) 117 кв.м. В собственности
гаражный бокс (общая долевая, доля в праве 1/3) 19 кв.м. В собственности
комната 18 кв.м. В пользовании
земельный участок 1019 кв.м. В пользовании
земельный участок 1002 кв.м.
В пользовании
супруг(а) земельный (под садово-огородническое использование и дачное хозяйство) участок 1019 кв.м. В собственности автомобиль легковой AUDI Q5

492 549 рублeй

земельный (под дачное строительство) участок 1002 кв.м. В собственности
квартира (долевая, доля в праве 1/4) 117 кв.м.
В собственности
комната 18 кв.м. В собственности
земельный участок 984 кв.м. В пользовании
гаражный бокс 19 кв.м. В пользовании
ребенок квартира (долевая, доля в праве 1/4) 117 кв.м. В собственности
гаражный бокс (общая долевая, доля в праве 1/3) 19 кв.м. В собственности
комната 18 кв.м. В пользовании
земельный участок 1019 кв.м. В пользовании
земельный участок 1002 кв.м. В пользовании
земельный участок
984 кв.м.
В пользовании
квартира (долевая, доля в праве 1/4) 117 кв.м. В собственности
гаражный бокс (общая долевая, доля в праве 1/3) 19 кв.м. В собственности
комната 18 кв.м. В пользовании
земельный участок 1019 кв.м. В пользовании
земельный участок 1002 кв.м. В пользовании
земельный участок 984 кв.м. В пользовании

✅ ИП РАЗУМОВА МАРИЯ ЛЕОНИДОВНА, 🏙 Ульяновск (OГРН 317732500014012, ИНН 732813187413) — 📄 реквизиты, 📞 контакты, ⭐ рейтинг

Последствия пандемии

В полной версии сервиса доступна вся информация по компаниям, которых коснулись последствия пандемии коронавируса: данные об ограничениях работы и о программе помощи от государства тем отраслям, которые испытывают падение спроса

Получить доступ

Краткая справка

ИП РАЗУМОВА МАРИЯ ЛЕОНИДОВНА было зарегистрировано 22 марта 2017 (существует 4 года) под ИНН 732813187413 и ОГРНИП 317732500014012. Местонахождение Ульяновская область, город Ульяновск. Основной вид деятельности ИП РАЗУМОВА МАРИЯ ЛЕОНИДОВНА: 69.10 Деятельность в области права. Телефон, адрес электронной почты, адрес официального сайта и другие контактные данные ИП РАЗУМОВА МАРИЯ ЛЕОНИДОВНА отсутствуют в ЕГРИП.

Информация на сайте предоставлена из официальных открытых государственных источников.

Контакты ИП РАЗУМОВА МАРИЯ ЛЕОНИДОВНА

Местонахождение

Россия, Ульяновская область, город Ульяновск

Зарегистрирован 22 марта 2017

Перейти ко всем адресам


Телефоны


Электронная почта


Разумова, Мария Андреевна — Тематические приоритеты и база источников информации деловых СМИ : на примере газет «Коммерсантъ» и «Ведомости» : автореферат дис. … кандидата филологических наук : 10.01.10


Поиск по определенным полям

Чтобы сузить результаты поисковой выдачи, можно уточнить запрос, указав поля, по которым производить поиск. Список полей представлен выше. Например:

author:иванов

Можно искать по нескольким полям одновременно:

author:иванов title:исследование

Логически операторы

По умолчанию используется оператор AND.
Оператор
AND
означает, что документ должен соответствовать всем элементам в группе:

исследование разработка

author:иванов title:разработка

оператор OR означает, что документ должен соответствовать одному из значений в группе:

исследование OR разработка

author:иванов OR title:разработка

оператор NOT исключает документы, содержащие данный элемент:

исследование NOT разработка

author:иванов NOT title:разработка

Тип поиска

При написании запроса можно указывать способ, по которому фраза будет искаться. Поддерживается четыре метода: поиск с учетом морфологии, без морфологии, поиск префикса, поиск фразы.
По-умолчанию, поиск производится с учетом морфологии.
Для поиска без морфологии, перед словами в фразе достаточно поставить знак «доллар»:

$исследование $развития

Для поиска префикса нужно поставить звездочку после запроса:

исследование*

Для поиска фразы нужно заключить запрос в двойные кавычки:

«исследование и разработка«

Поиск по синонимам

Для включения в результаты поиска синонимов слова нужно поставить решётку «#» перед словом или перед выражением в скобках.
В применении к одному слову для него будет найдено до трёх синонимов.
В применении к выражению в скобках к каждому слову будет добавлен синоним, если он был найден.
Не сочетается с поиском без морфологии, поиском по префиксу или поиском по фразе.

#исследование

Группировка

Для того, чтобы сгруппировать поисковые фразы нужно использовать скобки. Это позволяет управлять булевой логикой запроса.
Например, нужно составить запрос: найти документы у которых автор Иванов или Петров, и заглавие содержит слова исследование или разработка:

author:(иванов OR петров) title:(исследование OR разработка)

Приблизительный поиск слова

Для приблизительного поиска нужно поставить тильду «~» в конце слова из фразы. Например:

бром~

При поиске будут найдены такие слова, как «бром», «ром», «пром» и т.д.
Можно дополнительно указать максимальное количество возможных правок: 0, 1 или 2.4 разработка

По умолчанию, уровень равен 1. Допустимые значения — положительное вещественное число.
Поиск в интервале

Для указания интервала, в котором должно находиться значение какого-то поля, следует указать в скобках граничные значения, разделенные оператором TO.
Будет произведена лексикографическая сортировка.

author:[Иванов TO Петров]

Будут возвращены результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, Иванов и Петров будут включены в результат.

author:{Иванов TO Петров}

Такой запрос вернёт результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, но Иванов и Петров не будут включены в результат.
Для того, чтобы включить значение в интервал, используйте квадратные скобки. Для исключения значения используйте фигурные скобки.

Психолог Мария Александровна Разумова | Psiholog.Ru

Психоаналитик

Мария Александровна Разумова

Опыт консультирования: 6 лет

Для посетителей портала Psiholog.Ru

Скидка 10% на консультацию ОнЛайн!

Формат консультаций: консультации Он-лайн, консультации в чате, персональные консультации в формате личных встреч

Стоимость онлайн консультаций: 2 000 р. за 55 мин.

Консультация при личной встрече: 2 700 р. за 60 мин.

Психолог- психоаналитик. Член Европейской Конфедерации Психоаналитических Психотерапевтов.

  • Разумова Мария Александровна – психолог-психоаналитик, кпт- терапевт, схема- терапевт, специалист в области коммуникаций. Член Европейской конфедерации психоаналитической психотерапии (ЕКПП). 

    Образование: РГГУ (факультет психологии) 2012-2016

    Дополнительное образование: специалист по связям с общественностью (РУДН), профессиональная переподготовка «Психологическое консультирование и психодиагностика» (Московский институт современного академического образования), профессиональная переподготовка «Психология и психоанализ» (Восточно-Европейский Институт психоанализа), программа повышения квалификации «Активная сексология 21-го века для практических психологов 21-го века» (Московский институт психоанализа), программа повышения квалификации «Клиническая психология в педиатрии» (Национальный исследовательский институт дополнительного профессионального образования), программа повышения квалификации «Наркологическая превентология. Профилактика зависимости от психоактивных веществ (ПАВ)» (Национальный исследовательский институт дополнительного профессионального образования), программа повышения квалификации «Технологии системной семейной психотерапии в работе психолога с семьёй» (Национальный исследовательский институт дополнительного профессионального образования), программа повышения квалификации «Технологии краткосрочной индивидуальной диагностической и коррекционно-развивающей работы у детей и подростков с эмоциональными нарушениями» (Национальный исследовательский институт дополнительного профессионального образования), программа повышения квалификации «Терапия отношения: семейные конфликты и кризисы» (Восточно-Европейский Институт психоанализа), курс подготовки в «школе практической психологии» по психологическому консультированию (Центр правового и психологического сопровождения, г. Севастополь), программа повышения квалификации «Современный клинический психоанализ: от теории к практике» (Научно-исследовательский центр Восточно-Европейского Института психоанализа), программа повышения квалификации «Когнитивно-бихевиоральные технологии в клинической практике» (Московский институт психоанализа).

Образование:

Рггу 2012-2016 психолог

ВЕИП 2016-2019 психоаналитик

Документы об образовании

Отзывы и комментарии

Информация о психологе

Москва

Контактный телефон

показать номер ›

обязательно сообщите психологу, что нашли информацию на портале Psiholog.Ru

Личное сообщение

Специализация

Семейные отношения

Любовь

Дружба

Здоровье

Внешность и красота

Межличностные конфликты

Внутренний конфликт

Кризисные состояния

Депрессия, апатия

Страхи, фобии, тревоги

Стрессы, травмы

Зависимости и привычки

Выбор профессии, карьера

Проблема смысла жизни

Личностный рост

Мотивация и успех

Другой вопрос

Новости

В Омске (Омская область) завершились первенство и чемпионат России по спортивной аэробике. В соревнованиях приняли участие более 1000 спортсменов со всей страны.

Воспитанники отделения спортивной аэробики спортивной школы олимпийского резерва №2 Невского района Санкт-Петербурга завоевали 6 золотых, 6 серебряных и 1 бронзовую медали в различных возрастных категориях и номинациях.

В индивидуальных выступлениях среди девушек возрастной категории 12-14 лет серебряную медаль завоевала Лейсан Купершмит, бронзовый призер – Есения Федорченко. Среди юношей победу одержал Артем Хуруджи.

В соревнованиях среди пар (12-14 лет) обладателями золотых медалей стали Артем Хуруджи и Екатерина Шабалина.

В дисциплине «трио» (12-14 лет)  победу одержали Лейсан Купершмит, Екатерина Шабалина и Анфиса Кудрявцева. Серебряные медали – в активе Ирины Смирновой, Марии Панюшиной и Артема Хуруджи.

В соревнованиях среди групп (12-14 лет) обладателями золотых медалей стали Анастасия Разумова, Мария Панюшина, Екатерина Шабалина, Виталина Александрова и Анфиса Кудрявцева.

В индивидуальных выступлениях среди девушек возрастной категории 15-17 лет обладательницей золотой медали стала Полина Каккоева, серебряная медаль – у Варвары Зыбиной.

В дисциплине «трио» серебряные награды завоевали Полина Каккоева, Полина Попова и Елизавета Шевченко.

В соревнованиях среди групп обладателями золотых медалей стали Полина Каккоева, Варвара Зыбина, Ангелина Старкина, Полина Попова и Влада Шипаева.

Серебряными призерами чемпионата России в дисциплине «трио» стали Анастасия Зюбина, Елена Иванова и Юлия Плахотнюк.

В соревнованиях среди групп обладателями серебряных медалей стали Анастасия Зюбина, Елена Иванова, Юлия Плахотнюк, Тимур Кулаев и Петр Перминов (ГДЮЦФК).

По итогам соревнований спортсмены СШОР №2 Невского района Санкт-Петербурга прошли отбор на предстоящее первенство и чемпионат мира по спортивной аэробике, который состоится в конце мая 2021 года в г. Баку (Азербайджан).

Контакты — Центр спортивной подготовки спортивных сборных команд Свердловской области

Ф.И.О. Должность Телефон (внутренний номер) № кабинета Электронный адрес
Администрация
ЛЕОНОВ

Юрий Михайлович

Директор  288-76-92(120) 205 [email protected]
ГАЙЛ 

Вадим Викторович

Заместитель директора по спортивной работе 288-76-92(115) 201 [email protected]

[email protected]

ЧУПИЛОВА

Александра Сергеевна

Главный бухгалтер  288-76-92(121) 202 [email protected]
ВАНЮКОВ

Сергей Александрович

Заместитель директора по организационно-правовой работе и материально-техническому обеспечению 288-76-92(111)  

 

207

[email protected]
Бухгалтерия
КЛИМИНА 

Наталья Егоровна

Заместитель главного бухгалтера 288-76-92(110) 212 [email protected]
ТРЕТЬЯК

Владислав Анатольевич

Бухгалтер 288-76-92(131)  

212

[email protected]
БЕКШАЕВА 

Елена Александровна

Бухгалтер-кассир 288-76-92(105) 214 [email protected]
РАЗУМОВА 

Мария Леонидовна

Экономист 288-76-92(112) 213 [email protected]
ПЕРЕШЕИНА

Галина Викторовна

Бухгалтер по заработной плате 288-76-92(109) 213 [email protected]
Отдел кадров
ТОКАРЕВА 

Ольга Александровна

Начальник отдела  288-76-92(101) 210 [email protected]
ЛУКОЯНОВА

Ольга Игоревна

Специалист по кадрам 288-76-92(210) 210 [email protected]
АЗОВКИНА

Анна Антоновна

Специалист по охране труда 288-76-92(106) 102 [email protected]
Отдел летних видов спорта
ХЛЕБНИКОВА 

Наталья Анатольевна

Начальник отдела по летним видам спорта 288-76-92(117) 209 [email protected]
ЗАХАРОВА

Валерия Сергеевна

Администратор тренировочного процесса 288-76-92(108) 209 [email protected]
Отдел зимних видов спорта
НУРМХАМЕТОВА

Галина Романовна

Начальник отдела по зимним видам спорта 288-76-92(114) 211 [email protected]
ТИМОФЕЕВА

Юлия Евгеньевна

Инструктор-методист 288-76-92 (104) 211 [email protected]
ЧЕГОДАЕВ

Владислав Николаевич

Инструктор-методист 288-76-92 (116) 211 [email protected]
ШАКИРОВА

Диана Наильевна

 

Администратор тренировочного процесса

288-76-92 (123) 211
БАРТОШ

Николай Владимирович

 

Инструктор-методист 288-76-92(133) 211 [email protected]
Отдел координации и методического обеспечения организаций по подготовке спортивного резерва
ДЯДЮН

Анита Александровна

Начальник отдела 288-76-92(134) 303 [email protected]
ВЕДЕРНИКОВА

Александра Алексеевна

Статистик 288-76-92(208) 209 [email protected]
ВОЛКОВ 

Александр Викторович

Аналитик 288-76-92(911)  

217

[email protected]
Подразделение по проведению комплексных спортивных мероприятий (Спартакиады, Дети Азии и др.)
ВОЙТИК

Олег Алексеевич

Заместитель начальника 288-76-92(132) 302 [email protected]
УСКОВ

Павел Павлович

Специалист по антидопинговому обеспечению 288-76-92(003) 112 [email protected]
ЦЫРУЛИН

Сергей Александрович

Инструктор-методист 288-76-92(107) 302 [email protected]
Отдел развития спортивной инфраструктуры
НЕВЕРОВА

Ирина Ивановна

Начальник отдела 288-76-92 (124) 112 [email protected]
БРЫНЦЕВ

Анатолий Федорович

Инженер 288-76-92 (122) 114
Юридический отдел

ТЕРЮХОВА

Екатерина Сергеевна

Начальник отдела 288-76-92 (130) 107 [email protected]
ВЛАСОВ

Вадим Александрович

Инспектор по контролю за исполнением поручений 288-76-92 (127)  

203

РАХМЕНКУЛОВА

Людмила Владимировна

Юрисконсульт 288-76-92(113) 107 [email protected]
Отдел материально-технического обеспечения
ПОРОШИН

Александр Анатольевич

Начальник отдела 288-76-92 (125) 301 [email protected]
БЫСТРИКОВ

Павел Антонович

Системный администратор 288-76-92 (922) 217
КОНЫШЕВ

Константин Николаевич

Инженер по ремонту 288-76-92 (126) 102 [email protected]

Электронная почта и телефон Марии Разумовой

Мы установили стандарт поиска писем

Нам доверяют более 8,5 миллионов пользователей и 95% из S&P 500.


Нам не с чего начать. Обыскивать Интернет круглосуточно — это не поможет.RocketReach дал нам отличное место для старта. Теперь у нашего рабочего процесса есть четкое направление — у нас есть процесс, который начинается с RocketReach и заканчивается огромными списками контактов для нашей команды продаж … это, вероятно, сэкономит Feedtrail около 3 месяцев работы с точки зрения сбора потенциальных клиентов. Мы можем переключить наше внимание на поиски клиента прямо сейчас!

Отлично подходит для составления списка потенциальных клиентов.Мне понравилась возможность определять личные электронные письма практически от любого человека в Интернете с помощью RocketReach. Недавно мне поручили проект, который рассматривал обязанности по связям с общественностью, партнерству и разъяснительной работе, и RocketReach не только связал меня с потенциальными людьми, но и позволил мне оптимизировать мой поисковый подход на основе местоположения, набора навыков и ключевого слова.

Брайан Рэй , Менеджер по продажам @ Google

До RocketReach мы обращались к людям через профессиональные сетевые сайты, такие как Linkedln.Но нам было неприятно ждать, пока люди примут наши запросы на подключение (если они вообще их приняли), а их отправка обходится слишком дорого … это было серьезным ударом скорости в нашем рабочем процессе и источником нескончаемого разочарования. Благодаря огромному количеству контактов, которые мы смогли найти с помощью RocketReach, платформа, вероятно, сэкономила нам почти пять лет ожидания.

Это лучшая и самая эффективная поисковая машина по электронной почте, которую я когда-либо использовал, и я пробовал несколько.Как по объему поисков, так и по количеству найденных точных писем, я считаю, что он превосходит другие. Еще мне нравится макет, он приятный на вид, более привлекательный и эффективный. Суть в том, что это был эффективный инструмент в моей работе как некоммерческой организации, обращающейся к руководству.

До RocketReach процесс поиска адресов электронной почты состоял из поиска в Интернете, опроса общих друзей или преследования в LinkedIn.Больше всего меня расстраивало то, как много времени на все это требовалось. Впервые я использовал RocketReach, когда понял, что принял правильное решение. Поиск писем для контактов превратился в одноразовый процесс, а не на неделю.

Поиск электронных писем для целевого охвата был вручную и занимал очень много времени. Когда я попробовал RocketReach и нашел бизнес-информацию о ключевых людях за считанные секунды с помощью простого и непрерывного процесса, меня зацепило! Инструмент сократил время на установление связи с новыми потенциальными клиентами почти на 90%.

Электронная почта и телефон Марии Разумовой

Мария Разумова

Fullstack Web Developer

❅❅❅❅❅@similarweb.com

Посетите профиль

Daniel López

Full-Stack Web Developer

Посетить профиль

Шон Уилсон-Байно

Веб-разработчик полного стека

❅❅❅❅❅ @ ert.com

Посетите профиль

Абид Рахим

Веб-разработчик полного стека

❅❅❅❅❅@loconav.com

Посетите профиль

Джеффри Коэн

Полный стек Веб-разработчик

❅❅❅❅❅@ibisworld.com

+1 213 ❅❅❅ ❅❅❅❅

Посетить профиль

Александр Нупрейчик

Fullstack Web Developer

❅❅ ❅❅❅ @ oxagile.com

+375 2❅ ❅❅❅ ❅❅ ❅❅

Посетите профиль

Андрей Яхимович

Fullstack Web Developer

❅❅❅❅❅@oxagile.com

+375 2❅ ❅❅❅ ❅❅ ❅❅

Посетить профиль

Диана Винокур

Веб-разработчик Fullstack

❅❅❅❅❅@oxagile.com

+375 2 ❅❅❅ ❅❅ ❅❅

Профиль посещения

Разумова, Букатина, Кэмпбелл, 2000 — Репозиторий физиомных моделей

Статус модели

Эта модель работает в PCEnv и COR для воссоздания опубликованных результатов.Как описано в статье, эта модель имитирует изометрические условия и имеет параметры для v, w и u, равные 1. Это условие отсутствия кооперативности, но изменение этих значений допускает различные степени кооперативности. Активация Ca максимальна, чтобы имитировать Таблицу 2 в бумаге.

Структура модели

Резюме: Кооперативность в сократительном поведении систем миофиламентов почти наверняка возникает из-за взаимодействий между соседними участками.Эти взаимодействия могут быть разных видов. Регуляторные единицы тонких филаментов тропомиозина могут иметь соседей в стерических блокирующих положениях (выключено) или стерических пермиссивных позициях (включено). Положение этих соседей влияет на тенденцию регулирующего органа переходить во включенное или выключенное состояние. Точно так же тенденция миозиновых поперечных мостиков к достижению силового состояния может зависеть от того, находятся ли соседние поперечные мостики в силовых состояниях. Кроме того, поперечный мост в несущем состоянии может влиять на тенденцию регулирующего устройства входить во включенное состояние.Мы использовали математическую модель, чтобы изучить влияние каждого из этих трех видов взаимодействий между соседями на установившееся соотношение сила-pCa и на процесс восстановления динамической силы. Каждое взаимодействие между соседями было уникальным по своему влиянию на максимальную активированную Ca 2+ силу, положение и симметрию кривой сила-pCa и на коэффициент Хилла. Кроме того, взаимодействие каждого соседа по-своему влияло на временной ход развития силы, что оценивается его коэффициентом скорости, kdev. Эти разнообразные эффекты предполагают, что вариации всех трех видов взаимодействий ближайших соседей могут быть ответственны за широкий спектр в настоящее время необъяснимых наблюдений за сократительным поведением миофиламентов..

Принципиальная схема модели Разумовой и др. (Слева) восьмиступенчатая модель активации поперечного моста и езды на велосипеде. Отрезок тонкой нити представлен цепочкой из трех кружков. Единица регулирования тонкой нити представлена ​​полосой, связанной с цепочкой из 3-х кругов. Блок регулирования находится во включенном состоянии, когда полоса находится над цепью с 3 кругами, и в выключенном состоянии, когда полоса находится под цепью. Миозиновый поперечный мостик представлен заштрихованным эллипсом с закрученным хвостом.Перемычка может быть отсоединена (D) или прикреплена (A1, A2) к тонкой нити. В изометрических условиях силовая нагрузка определяется состоянием А2 после такта. Кальций связан с регуляторной единицей всеми состояниями в левой половине левой панели и не связан со всеми состояниями в правой половине левой панели. Верхние индексы указывают на статус связывания кальция. См. В тексте определения и подробные объяснения. (Справа) Уменьшенное представление модели с 8 состояниями с 4 состояниями. Связывание и диссоциация кальция теперь находится в пределах кальциевой зависимости коэффициентов скорости kon (Ca) и koff (Ca).
Полный исходный текст статьи цитируется ниже:

Различные взаимодействия ближайших соседей миофиламентов по-разному влияют на сократительное поведение Мария В. Разумова, Анна Е. Букатина, Кеннет Б. Кэмпбелл, 2000, Biophysical Journal , 78, 3120-3137. Идентификатор PubMed: 10827989

Кинетика миофиламентов в изометрической динамике подергивания

  • 1

    Барани, М. АТФазная активность миозина коррелирует со скоростью сокращения мышц. Дж . Поколение . Физиология . 50: 197–208, 1967.

    Google Scholar

  • 2

    Брандт, П. У., М. С. Даймонд, Дж. С. Рутчик и Ф. Х. Сачат. Кооперативные взаимодействия между единицами тропонин-тропомиозин увеличивают длину тонкой нити в скелетных мышцах. Дж . Мол . Биол . 195: 885–896, 1987.

    Google Scholar

  • 3

    Брандт, П.У., М. С. Даймонд и Ф. Х. Сачат. Тонкая нить скелетных мышц позвоночных совместно активируется как единое целое. Дж . Мол . Биол . 180: 379–384, 1984.

    Google Scholar

  • 4

    Бремель Р. Д. и А. Вебер. Сотрудничество внутри актинового филамента в скелетных мышцах позвоночных. Nature (Лондон), New Biol . 238: 97–101, 1972 г.

    Google Scholar

  • 5

    Бреннер, Б.Корреляция между циклом кроссбриджа в мышцах и циклом актомиозин-АТФазы в растворе. Дж . Musc. Res. Сотовый Mot . 6: 559–664, 1985.

    Google Scholar

  • 6

    Бреннер, Б. Цикл поперечного моста в мышцах. Механические, биохимические и структурные исследования кинетики одной мышцы на предмет корреляции с актомиозин-АТФазой в растворе. Основная резолюция . Кардиол . 81: 1–15, 1986.

    Google Scholar

  • 7

    Кэмпбелл, К.Константа скорости восстановления мышечной силы отражает совместную активацию, а также кинетику поперечного мостика. Биофизика . Дж . 72: 254–262, 1997.

    Google Scholar

  • 8

    Кэмпбелл, К. Б., М. Разумова, Р. Д. Киркпатрик и Б. К. Слинкер. Модель с переменной активностью миофиламента для исследований и приложений мышечного сокращения. Диссертация, Университет штата Вашингтон, 23 августа 2000 г., http: // people.vetmed.wsu.edu/KenCampbell.

  • 9

    Cecchi, G., and M.A. Bagni. Расстояние между решетками миофиламентов влияет на напряжение поперечно-полосатой мышцы. Новости Physiol . Наука . 9: 3–7, 1994.

    Google Scholar

  • 10

    Дэниэлс, Т. Л., А. К. Тримбл и П. Б. Чейз. Соответствующее изменение мест связывания в мышцах: переходное поведение и механическая настройка. Биофизика . Дж . 74: 1611–1621, 1998.

    Google Scholar

  • 11

    Дживс, М.А. и С. С. Лерер. Динамика регуляторного переключателя мышечной тонкой нити: размер кооперативной единицы. Биофизика . Дж . 67: 273–282, 1994.

    Google Scholar

  • 12

    Годт Р. Э. и Д. У. Моэн. Влияние осмотического сжатия на активацию кальция и напряжение в кожных мышечных волокнах кролика. Арка Пфлюгерса . 391: 334–337, 1981.

    Google Scholar

  • 13

    Гольдман Ю.Кинетика актомиозиновой АТФазы в мышечных волокнах. Анну . Ред. . Физиология . 49: 637–654, 1987.

    Google Scholar

  • 14

    Guth, K., K. J. V. Poole, D. Maughan и H. J. Kuhn. Кажущиеся скорости прикрепления и отсоединения поперечного моста оцениваются по активности АТФазы в летательных мышцах насекомых. Биофизика . Дж . 52: 1039–1045, 1987.

    Google Scholar

  • 15

    Хилл, Т.L. Теория кооперативности в биохимии. Нью-Йорк: Springer, 1985.

    . Google Scholar

  • 16

    Хаксли, А. Ф. Структура мышц и теории сокращения. Программа . Биофизика . Биофизика . Химия . 7: 255–318, 1957.

    PubMed Google Scholar

  • 17

    Янсен, П. М. Л. и У. К. Хантер. Сила, а не длина коррелирует с прологацией изосаркомерного сокращения. Am . Дж . Физиология . 269: H676 – H685, 1995.

    Google Scholar

  • 18

    Разумова М.В., Букатина А.Е., Кэмпбелл К. Модель саркомера деформации жесткости для моделирования мышц. Дж . Заявление . Физиология . 87: 1861–1876, 1999.

    Google Scholar

  • 19

    Разумова М.В., Букатина А.Е., К.Б.Кэмпбелл. Различные взаимодействия миофиламентов с ближайшими соседями по-разному влияют на сократительное поведение. Биофизика . Дж . 78: 1320–1876, 2000.

    Google Scholar

  • 20

    Rome, L.C., and S.L. Lindstedt. Стремление к скорости: мышцы созданы для высокочастотных сокращений. Новости Physiol . Наука . 13: 261–268, 1998.

    Google Scholar

  • 21

    Рим, Л.К., Д. А. Сайм, С. Холлингворт, С. Л. Линдстедт и С. М. Бэйлор. Свист и погремушка: конструкция мускулов, производящих звук. Протокол . Нац. . Акад. . Наука . У . С . А . 93: 8095–8100, 1996.

    Google Scholar

  • 22

    С. М. Селби, редактор, CRC Standard Math Tables, 16-е изд. Кливленд, Огайо: The Chemical Rubber Company, 1968.

    Google Scholar

  • 23

    Соларо, Р.Дж. И Х. М. Рарик. Тропонин и тропомиозин: белки, которые включают и настраивают активность сердечных миофиламентов. Цирк . Рез. . 83: 471–480, 1998.

    Google Scholar

  • 24

    Tobacman, L. S. Регулирование сердечного сокращения, опосредованное тонкими нитями. Анну . Ред. . Физиология . 58: 447–481, 1996.

    Google Scholar

  • 25

    Тобиас, А.Х., Б. К. Слинкер, Р. Д. Киркпатрик и К. Б. Кэмпбелл. Механические детерминанты релаксации левого желудочка. Am . Дж . Физиология . 268: h270 – h277, 1995.

    Google Scholar

  • 26

    Рэй, Дж. С. Геометрия нитей и активация летательных мышц насекомых. Nature (Лондон) 280: 325–326, 1979.

    Google Scholar

  • 2-дезоксиаденозинтрифосфат улучшает сокращение при терминальной стадии сердечной недостаточности у человека

    Основные моменты

    Сокращение в образце сердечной недостаточности человека измеряли в присутствии АТФ или дАТФ.

    dATP увеличивает изометрическую силу и чувствительность Ca 2 + в образцах без мембран.

    dATP увеличивает скорость восстановления силы в образцах без мембраны.

    Замена 10% дАТФ значительно увеличивает изометрическую силу.

    dATP увеличивает скорость активации миофибрилл без изменения кинетики релаксации.

    Abstract

    Мы разрабатываем новый метод лечения сердечной недостаточности за счет увеличения 2-дезокси-АТФ в миокарде (dATP).Наши исследования на моделях грызунов показали, что замена аденозинтрифосфата (АТФ) на аденозинтрифосфат (АТФ) в качестве энергетического субстрата in vitro или повышение уровня dATP in vivo увеличивает сокращение миокарда и что небольшого увеличения пула нативного dATP сердечной мышцы достаточно для улучшения сердечной функции. . Здесь мы впервые сообщаем о влиянии dATP на сокращение сердечной мышцы взрослого человека. Мы измерили сократительные свойства химически демембранных препаратов многоклеточных стенок желудочков и изолированных миофибрилл у людей с терминальной сердечной недостаточностью.Изометрическая сила увеличивалась как при насыщающих, так и при физиологических концентрациях Ca 2 + с dATP по сравнению с ATP. Это привело к увеличению чувствительности к силе Ca 2 + (pCa 50 ) на 0,06 единиц pCa. Скорость восстановления силы (k tr ) в мышце с демембранной стенкой также была увеличена, как и скорость сократительной активации ( k ACT ) в изолированных миофибриллах, что указывает на усиление связывания поперечных мостиков и цикличности по сравнению с АТФ в выход из строя миокарда человека.Эти данные предполагают, что dATP может увеличивать dP / dT и конечное систолическое давление в миокарде человека с недостаточностью. Важно отметить, что даже несмотря на то, что величина и скорость развития силы были увеличены, не было увеличения времени до 50% и 90% релаксации миофибрилл. Эти данные, наряду с нашими предыдущими исследованиями на моделях грызунов, показывают перспективность повышения dATP миокарда для усиления сокращения и восстановления насосной функции сердца. Эти данные также подтверждают дальнейшую доклиническую оценку этого нового подхода к лечению сердечной недостаточности.

    Сокращения

    ATP

    аденозинтрифосфат

    dATP

    2-дезоксиаденозинтрифосфат

    LVAD

    вспомогательное устройство левого желудочка

    R1R2

    отказ

    Сокращение

    Миофибриллы

    Ca 2 + чувствительность

    Лечение

    Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

    Полный текст

    Copyright © 2014 Elsevier Ltd.Все права защищены.

    Рекомендуемые статьи

    Ссылки на статьи

    Вклад миозин-связывающего белка С в функциональные эффекты в проницаемых трабекулах крыс | Журнал общей физиологии

    Миозин-связывающий протеин C (MyBP-C) представляет собой протеин из толстых филаментов, который ограничивает скорость циклического перехода между мостами и снижает выходную мощность миоцитов. Чтобы исследовать механизмы, с помощью которых MyBP-C влияет на сокращение, мы оценили эффекты рекомбинантных N-концевых доменов сердечного MyBP-C (cMyBP-C) на сократительные свойства проницаемых сердечных трабекул крыс.Здесь мы показываем, что N-концевые фрагменты cMyBP-C, содержащие первые три иммуноглобулиновых домена cMyBP-C (т.е. C0, C1 и C2) плюс уникальная линкерная последовательность, называемая «мотивом» MyBP-C или «m -домен »увеличивал чувствительность к натяжению Ca 2+ и увеличивал скорость восстановления натяжения (т.е. k tr ) при субмаксимальных уровнях Ca 2+ . При концентрациях ≥20 мкМ рекомбинантные белки также активировали силу в отсутствие Ca 2+ и ингибировали максимальную силу, активируемую Ca 2+ .Рекомбинантные белки, в которых отсутствовала комбинация C1 и мотива, не влияли на сократительные свойства. Эти результаты предполагают, что домен C1 плюс мотив составляют функциональную единицу MyBP-C, которая может активировать тонкий филамент.

    Миозин-связывающий белок C (MyBP-C) представляет собой саркомерный белок, состоящий из повторяющихся доменов, гомологичных доменам Ig или фибронектина типа III (Einheber and Fischman, 1990; Furst et al., 1992; Gautel et al., 1995). Скелетные изоформы MyBP-C содержат 10 таких доменов, обозначенных от C1 до C10, тогда как сердечный MyBP-C (cMyBP-C) содержит дополнительный домен Ig на своем N-конце, обозначенный как C0 (см. Рис. 1). Между доменами C1 и C2 находится линкерная последовательность, называемая «мотивом» MyBP-C, которая является высококонсервативной среди различных изоформ MyBP-C (Gautel et al., 1995).

    Анализ последовательности мотива показывает, что он уникален для белков MyBP-C, но его функциональное значение не совсем понятно.Регуляторная роль этого региона была предложена на основании наблюдений, что мотив cMyBP-C фосфорилируется протеинкиназой A в ответ на инотропные стимулы (Gautel et al., 1995; Gruen et al., 1999). Мотив также связывает миозин S2 (Gruen and Gautel, 1999), а фосфорилирование с помощью протеинкиназы A отменяет связывание, подтверждая, что взаимодействие мотив-S2 важно для регуляторных эффектов cMyBP-C. В соответствии с этой идеей рекомбинантные белки, содержащие мотив, увеличивают чувствительность к напряжению Ca 2+ в пермеабилизированных сердечных миоцитах и ​​волокнах скелетных мышц (Kunst et al., 2000; Harris et al., 2004) и двухфазно активирующие и ингибирующие взаимодействия актомиозина в анализах подвижности in vitro (Razumova et al., 2006; Shaffer et al., 2007). Однако в анализах подвижности функциональные эффекты либо полноразмерного cMyBP-C (Saber et al., 2008), либо его N-концевых доменов (Shaffer et al., 2007) не зависели от связывания миозина S2, что позволяет предположить, что взаимодействия мотив с лигандами, отличными от S2, важен в опосредовании функциональных эффектов cMyBP-C. Альтернативно, последовательности вне мотива могут опосредовать наблюдаемые функциональные эффекты N-конца cMyBP-C.В соответствии с последней идеей, C0-домен, специфичный для сердца, как сообщается, связывает актин и увеличивает чувствительность к напряжению Ca 2+ (Kulikovskaya et al., 2003). Herron et al. (2006) также обнаружили, что богатая пролином-аланином область, предшествующая C1, активирует сокращение независимо от Ca 2+ в пермеабилизированных сердечных препаратах. Мотив MyBP-C не требовался для последних активирующих эффектов. Однако эффекты наблюдались только при высоких концентрациях белка, и не было определено, сохраняются ли активирующие эффекты в присутствии Ca 2+ .

    Целью настоящего исследования было оценить важность мотива MyBP-C в влиянии на сократительные свойства актомиозина, отдельно или в комбинации с другими N-концевыми доменами MyBP-C. Результаты демонстрируют, что мотив MyBP-C вместе с доменом C1 необходим для эффектов N-конца cMyBP-C для повышения чувствительности к напряжению Ca 2+ , увеличения скорости восстановления напряжения ( k tr ) при субмаксимальный [Ca 2+ ] и увеличивает развитие напряжения в отсутствие Ca 2+ .

    Величина силы, создаваемой в данном экспериментальном растворе, была измерена как разница калиброванного выходного напряжения датчика силы, записанного до и после быстрого ослабления трабекулы до 80% ее длины покоя (где длина покоя была установлена ​​на длину саркомера равной ∼2,3 мкм). Команды ввода в двигатель для управления длиной были инициированы через ПК с помощью программного пакета 600A (Aurora Scientific Inc.) и подается в двигатель через цифро-аналоговый преобразователь. Выходные сигналы длины и силы оцифровывались с помощью аналого-цифрового преобразователя, отображались и сохранялись на ПК. Все измерения силы проводились при 15 ° C.

    Протокол определения силы, активируемой Ca 2+ , был следующим: сначала измеряли силу в растворе pCa 9.0 с последующим переносом трабекулы в раствор для предварительной активации (уменьшенная буферизация Ca 2+ ) в течение ~ 2 мин перед переводом в активирующий раствор, содержащим Ca 2+ , и измерением развиваемой силы.Затем рассчитывали силу, активируемую Ca 2+ , как разницу между силой покоя, измеренной при pCa 9,0, и силой, измеренной в активирующих растворах Ca 2+ с концентрациями свободного Ca 2+ pCa <9,0. Конечные значения силы, активируемой Ca 2+ , были нормализованы к ширине препарата, предполагая, что площадь поперечного сечения ширина / высота составляет 2: 1.

    Зависимость сила – pCa была построена на основе измерений силы, как описано выше для серии активаций при субмаксимальном [Ca 2+ ] (pCa> 4.5). Порядок активации растворов выбирался случайным образом для каждой трабекулы. После каждой активации Ca 2+ при субмаксимальном pCa трабекулу возвращали в расслабляющий раствор (pCa 9,0). Измерения максимальной силы были получены при насыщении Ca 2+ (т.е. при pCa 4,5) в начале и в конце каждой серии измерений субмаксимальной силы. Как правило, снижение силы от первого измерения pCa 4.5 до последнего измерения pCa 4.5 составляло <10%. Данные экспериментов, в которых общее снижение составило> 15%, были отброшены.Это включало эксперименты, в которых множественные отношения сила-pCa измерялись в одной трабекуле.

    Данные

    Force-pCa были построены путем выражения субмаксимальной силы ( P ) на каждом pCa как доли максимальной силы, измеренной при pCa 4,5 ( P o ), то есть P / P o , где P / P o = P отн. .{n_ {H} (pCa {-} pCa_ {50})}}. \]

    Ранее мы показали, что рекомбинантный белок, содержащий домены от C1 до C2 cMyBP-C (т.е. C1C2; рис. 1), увеличивает чувствительность к напряжению Ca 2+ в пермеабилизированных миоцитах мыши (Harris et al., 2004). Чтобы определить, требуется ли мотив MyBP-C для эффектов C1C2, мы создали мутантный белок C1C2, у которого отсутствовала последовательность мотива между доменами C1 и C2 (т.е.е., C1C2 [-m]) и сравнил его эффекты с эффектами C1C2 (изобилует мотивом) на чувствительность силы Ca 2+ в проницаемых сердечных трабекулах крыс. Как показано на рис. 3А, добавление 10 мкМ C1C2 к расслабляющим (pCa 9,0) и предварительно активирующим растворам привело к значительно большей силе, активируемой Ca 2+ , в субмаксимальных растворах pCa, на что указывает сдвиг силы влево. Отношение –pCa по сравнению с контрольными кривыми, полученными до добавления белка. Таким образом, эти данные согласуются с предыдущими наблюдениями о том, что C1C2 увеличивает чувствительность к напряжению Ca 2+ в пермеабилизированных миоцитах мыши (Harris et al., 2004). Однако, в отличие от эффектов C1C2, 20 мкМ C1C2 (-m), в котором отсутствовал мотив, не увеличивали чувствительность к натяжению Ca 2+ , что позволяет предположить, что мотив необходим для воздействия C1C2 на силу при субмаксимальные концентрации pCa.

    Чтобы определить, был ли мотив достаточным, чтобы вызвать сдвиг влево отношения натяжение-pCa, мы затем исследовали, может ли мотив придавать способность повышать чувствительность Ca 2+ другим сегментам cMyBP-C.Поскольку отдельные домены Ig могут быть нестабильными при экспрессии по отдельности (Politou et al., 1994a, 1994b), мы экспрессировали мотив как линкер между доменами C3 и C4. Как показано на Рис. 3B, трехдоменный сегмент C2C4 (включая C3) не оказывает значительного влияния на отношения сила-pCa. Однако добавление мотива между доменами C3 и C4 (т.е. C3mC4) также не смогло вызвать сдвиг влево отношения натяжение-pCa. Эти результаты предполагают, что домены Ig C2, C3 и C4 не влияют на силу и что добавления мотива к этим доменам недостаточно для повышения чувствительности к натяжению Ca 2+ .

    Затем мы исследовали, требует ли Ca 2+ -сенсибилизирующие эффекты мотива присутствия фланкирующих областей C1 или C2. Поэтому мы создали белковые конструкции, которые объединили мотив с одним или другим фланкирующим доменом, то есть C1m или mC2. Как показано на рис. 4A, конструкция C1m была эффективной при индукции сдвига влево отношения сила-pCa, тогда как mC2 в сравнимой концентрации не вызывала сдвига влево.В совокупности эти результаты предполагают, что мотив плюс C1, но не мотив плюс C2, необходимы для Ca 2+ -сенсибилизирующих эффектов C1C2.

    Чтобы определить, эффективен ли C1 без мотива в повышении чувствительности к натяжению Ca 2+ , также оценивали эффекты C0C1. Как показано на фиг. 4B, C0C1 не оказал значительного влияния на чувствительность силы Ca 2+ . Этот результат согласуется с наблюдениями, что C1C2 (-m), в котором отсутствует мотив, но включает C1, также не влияет на отношения сила-pCa (рис.3). Однако добавление мотива к C0C1 (т. Е. C0C1m) снова дало заметный сдвиг влево для отношения сила-pCa. Таким образом, эти результаты предполагают, что комбинация как мотива, так и C1 является минимальной необходимой для Ca 2+ -сенсибилизирующих эффектов C1C2.

    Рис. 5 показывает сравнение соотношений сила – pCa для белков, содержащих C1 и m-домены. Относительная эффективность различных белков, оцениваемая по сдвигу средней точки в соотношении сила – pCa (т.е.е., ΔpCa 50 ) было C0C2> C0C1m ≥ C1C2> C1m. Т.о., хотя C1m является минимальной субъединицей, способной вызывать сдвиг влево отношения сила-pCa, она не так эффективна, как белки, содержащие либо C0, либо C2 домены в дополнение к C1m. Сводные данные по эффектам различных белков приведены в таблице I.

    Чтобы оценить, влияет ли мотив или C1 на скорость активации силы в дополнение к их эффектам на установившиеся отношения силы и pCa, скорость восстановления силы после маневра отпускания и повторного растяжения (т.е., k tr ) измеряли во время каждой активации Ca 2+ . На рис. 6А показаны репрезентативные записи силы после протокола высвобождения и повторного растяжения для контрольных условий в отсутствие добавленного белка и после инкубации трабекулы с 5 мкМ C0C2. Инкубация с C0C2 значительно ускорила k tr , так что значения были близки к максимальным во всех растворах pCa (рис. 6 B). Таким образом, зависимость k tr от Ca 2+ была практически устранена инкубацией в 5 мкМ C0C2.Поскольку скорость восстановления натяжения изменяется в зависимости от общего уровня активации тонких волокон (т. Е. k tr увеличивается в результате как Ca 2+ , так и прочно связанных поперечных мостиков; Gordon et al. . [2000]), значения k tr также были нанесены как функция относительной силы, полученной на каждом pCa. Как показано на рис. 7 A, значения k tr , измеренные после инкубации с C0C2, были близки к максимальным даже при низких уровнях силы.Таким образом, C0C2 увеличил k tr до почти максимальных уровней независимо от величины создаваемой силы или, предположительно, количества циклических поперечных мостов.

    Как показано на рис. 7B, C0C1m и C1C2 также были эффективны при увеличении k tr при субмаксимальном Ca 2+ . C1m, по-видимому, представляет минимальные области, необходимые для этих эффектов. Однако увеличение k tr , индуцированное C1m, было очевидным только для ограниченного диапазона значений pCa и силы ниже pCa 50 генерирования силы (рис.7 В). Таким образом, порядок эффективности воздействия белков на k tr был подобен тому, который наблюдали для эффектов на отношения pCa – сила, то есть C0C2> C0C1m ≥ C1C2> C1m. Белки, которые не содержали комбинацию C1 плюс мотив, не влияли на k tr (не изображено).

    Целью этого исследования было изучить функциональное значение уникального мотива или «m-домена» MyBP-C в опосредовании сократительных эффектов, индуцированных N-концом MyBP-C.Результаты показывают, что мотив необходим, но недостаточен сам по себе для индукции функциональных эффектов, вызываемых N-концом MyBP-C в проницаемых трабекулах. Вместо этого результаты демонстрируют, что необходима комбинация домена C1 и мотива, и предполагают, что вместе эти домены составляют функциональную единицу MyBP-C.

    Эффекты сокращения, описанные здесь для домена C1 и мотива, ранее не сообщались для домена C1 или для домена C1 и мотива в комбинации друг с другом.Однако результаты подтверждают и расширяют предыдущие наблюдения сократительных эффектов C1C2 (который содержит C1 и мотив) и локализуют Ca 2+ -сенсибилизирующие эффекты C1C2 на C1 и m-домены. Этот вывод был очевиден, потому что конструкции, в которых отсутствовал мотив, такой как C1C2 (-m), C0C1 и C2C4, не влияли на сократительные свойства в тестируемых концентрациях (Фиг.3 и 4 и Таблица I). Однако самого мотива было недостаточно для увеличения чувствительности Ca 2+ , потому что ни C3mC4, ни mC2 не индуцировали сдвиги влево отношения натяжение – pCa.Вместо этого только белки, которые включали комбинацию домена C1 и мотива, такие как C0C1m, C0C2 (включая C1m) и C1m, были способны повышать чувствительность к натяжению Ca 2+ (Таблица I).

    Обнаружение того, что комбинация C1 и мотива необходима для индукции сократительных эффектов, предполагает, что эти два домена вместе составляют функциональную субъединицу cMyBP-C. В соответствии с этой идеей недавние структурные исследования N-конца cMyBP-C показали, что C1 и мотив принимают стабильное пространственное расположение относительно друг друга, и что расположение сохраняется в присутствии или в отсутствие C0 (Jeffries et al., 2008). Таким образом, C1 и мотив вместе могут образовывать протяженную структурную поверхность, которая опосредует функциональные эффекты N-конца cMyBP-C. Идея о том, что несколько доменов Ig могут создавать расширенную поверхность взаимодействия, дополнительно подтверждается наблюдениями, что три домена тайтина (т.е. A168-A170) составляют сайт связывания для убиквитинлигазы, MuRF-1 (Mrosek et al., 2007; Muller et al. др., 2007). В качестве альтернативы, потребность как в C1, так и в m-доменах может указывать на то, что один домен требуется для стабилизации другого.Например, домены Ig могут быть нестабильными при экспрессии по отдельности, но могут быть стабилизированы дополнительными N-концевыми аминокислотами (Politou et al., 1994a, 1994b). Потребность в C1 может отражать структурную стабилизацию m-домена. В этом случае эффекты все еще могут быть специфически связаны либо с C1, либо с линкером между C1 и мотивом (Muller et al., 2007), потому что C3 не смог заменить C1, когда мотив был помещен между C3 и C4.

    Хотя мы не обнаружили, что другие N-концевые домены cMyBP-C вызывали независимые эффекты на генерацию силы, два домена, фланкирующие C1m, C0 и C2, значительно усиливали эффекты C1m (рис.5). Из них сердечно-специфический домен C0 был наиболее эффективным, а белки, содержащие комбинацию C0 и C1m (например, C0C2 и C0C1m), вызывали наибольшее повышение чувствительности к напряжению Ca 2+ . Белки, содержащие C0 вместе с C1m, также увеличивали k tr на всех субмаксимальных уровнях активации и практически устраняли активационную зависимость k tr (рис. 7) . Однако эффекты C0 для усиления эффектов C1m, описанные здесь, контрастируют с другим сообщением, в котором одного домена C0 было достаточно для повышения чувствительности к напряжению Ca 2+ и подавления максимальной силы, активируемой Ca 2+ (Куликовская и др. ., 2003). В этом исследовании эффекты CO коррелировали с состоянием фосфорилирования эндогенного cMyBP-C, так что эффекты CO уменьшались при дефосфорилировании эндогенного cMyBP-C. Поскольку вероятно, что трабекулы, использованные в данном исследовании, были существенно дефосфорилированы (McClellan et al., 2001), независимые функциональные эффекты CO не могли быть очевидны.

    C1 и m-домены также были эффективны при активации силы в отсутствие Ca 2+ (рис.8 и Таблица II). Этот результат аналогичен наблюдениям, сделанным Herron et al. (2006), которые сообщили, что N-конец cMyBP-C активирует силу независимо от Ca 2+ . Однако в этих экспериментах эффект был приписан линкерной последовательности, богатой пролином и аланином, между доменами C0 и C1. Напротив, в текущих экспериментах мы обнаружили, что белок C0C1, который включает последовательность про-ala, не влияет на чувствительность к напряжению Ca 2+ и не активирует напряжение в расслабляющих условиях при pCa 9.0 даже при концентрациях до 50 мкМ. Хотя точное объяснение очевидного несоответствия неясно, видоспецифические различия могут иметь значение, потому что мышиные последовательности использовались в текущем исследовании, тогда как человеческие белки использовались в предыдущей работе (Herron et al., 2006). Примечательно, что богатая пролином-аланином область значительно различается (идентичность ~ 52%) у мышей и человека и, таким образом, может вносить вклад в функциональные различия, наблюдаемые в двух исследованиях. Также могут существовать различия в типах мышц, поскольку Kunst et al.(Kunst et al., 2000) с использованием человеческого C0C1 в проницаемых скелетных мышцах получили результаты, аналогичные представленным здесь, и обнаружили, что 30 мкМ C0C1 не влияли на чувствительность к напряжению Ca 2+ и не активировали напряжение при pCa 9,0.

    Обнаружение того, что C1 и мотив увеличивали чувствительность к натяжению Ca 2+ , увеличивали k tr при субмаксимальном [Ca 2+ ] и активировали натяжение в отсутствие Ca 2+ (pCa 9 .0) предполагают, что вместе эти два домена являются мощными активаторами тонкой нити. Хотя точный механизм (ы), с помощью которого домен и мотив C1 вызывают эти эффекты, не очевидны из этих исследований, возможны несколько объяснений. Во-первых, домен C1 и мотив связываются непосредственно с тонкой нитью и тем самым способствуют ее активации. Согласно этому сценарию, эффекты C1m могут быть аналогичны эффектам сильно связанных поперечных мостиков. В соответствии с этой идеей, эффекты C1m аналогичны эффектам NEM-S1, химического производного миозина S1, который не обладает ферментативной активностью, но прочно связывается с тонкой нитью и активирует ее (Nagashima and Asakura, 1982; Swartz and Moss, 1992; Fitzsimons et al., 2001а, 2001б). Примечательно, что в сердечной мышце и C1m, и NEM-S1 активируют силу в отсутствие Ca 2+ (pCa 9.0), вызывают сдвиг влево в соотношении напряжение – pCa и ускоряют k tr при субмаксимальном [Ca 2+ ] (Fitzsimons et al., 2001b). И C1m, и NEM-S1 также ингибируют максимальную силу, активируемую Ca 2+ , при pCa 4,5. Поскольку последний эффект NEM-S1 объясняется конкурентным ингибированием эндогенных (циклических) перекрестных мостиков высокими концентрациями NEM-S1 (Swartz and Moss, 1992), сходство может указывать на то, что C1m аналогичным образом ограничивает связывание S1.Однако, хотя было показано, что C1C2 связывается с актином (Razumova et al., 2006), конкурентное связывание C1m с миозином S1 еще не установлено.

    Вторая возможность состоит в том, что вместо связывания с тонкой нитью C1m взаимодействует с толстой нитью и способствует образованию прочных поперечных мостиков. Согласно этому сценарию, C1m может усиливать образование прочно связанных поперечных мостиков и тем самым косвенно активировать тонкую нить.В соответствии с этой идеей, есть доказательства того, что MyBP-C стабилизирует сильно связанное состояние после инсульта (Palmer et al., 2004). Более того, взаимодействия с толстым филаментом вероятны, потому что C1C2 связывается с миозином S2 (Gruen and Gautel, 1999). Однако, возражая против этого сценария, связывание S2 не требовалось для активации эффектов C1C2 на взаимодействия актомиозина в анализе подвижности in vitro, поскольку C1C2 влиял на подвижность, даже когда каталитические домены S1 (без S2) использовались для управления скольжением актиновых филаментов (Shaffer et al. ., 2007).

    Другие возможности включают идею о том, что различные функциональные эффекты C1m (например, для увеличения чувствительности к напряжению Ca 2+ , увеличения k tr на субмаксимальном уровне [Ca 2+ ] и для активации напряжения независимо от Ca 2+ ) опосредуются отдельными независимыми взаимодействиями с одним или обоими филаментами. Кроме того, нельзя исключить возможность того, что наблюдаемые эффекты C1m обусловлены конкуренцией с эндогенным cMyBP-C за связывание с сайтами, обычно занятыми эндогенным cMyBP-C.Эта возможность кажется маловероятной, потому что C1C2 также увеличивает чувствительность к напряжению Ca 2+ в миоцитах мышей с нокаутом cMyBP-C, у которых отсутствует cMyBP-C (Harris et al., 2004). Последний результат предполагает, что наблюдаемые эффекты не зависят от присутствия эндогенного cMyBP-C и, следовательно, не могут быть следствием конкуренции за связывание с эндогенным cMyBP-C. Кроме того, поскольку cMyBP-C присутствует в ограниченном молярном соотношении по отношению к миозину (Offer et al., 1973; Craig and Offer, 1976), вполне вероятно, что даже когда присутствует эндогенный cMyBP-C (как в текущих экспериментах ), большинство доступных сайтов связывания открыты и доступны для взаимодействия с экзогенно добавленным белком.

    Идея о том, что экзогенно добавленные белки могут связываться со всеми доступными сайтами связывания, а не только с теми, которые обычно заняты эндогенным cMyBP-C, может объяснить настоящие наблюдения, согласно которым добавленные рекомбинантные белки вызывают значительное повышение чувствительности к натяжению Ca 2+ , тогда как нокаут эндогенного cMyBP-C оказал сравнительно умеренное влияние на чувствительность к натяжению Ca 2+ (Harris et al., 2002; Stelzer et al., 2006). Напротив, нокаут cMyBP-C увеличивал скорость восстановления напряжения ( k tr ) при субмаксимальном Ca 2+ (Korte et al., 2003; Stelzer et al., 2006), аналогично эффектам добавления экзогенные белки, описанные здесь. Сходство эффектов, несмотря на противоположные нарушения (нокаут белка против добавления белка), предполагает, что cMyBP-C может влиять на кинетику взаимодействия актомиозина посредством множества различных механизмов. Например, cMyBP-C было предложено для привязки миозиновых головок к толстой нити (Calaghan et al., 2000). Высвобождение головок поперечных мостов путем разрыва привязи, либо путем нокаута cMyBP-C, либо фосфорилирования мотива, может тем самым увеличивать пространственную протяженность головок миозина и, следовательно, ускорять взаимодействия с актином (Colson et al., 2008). С другой стороны, Nagayama et al. (2007) обнаружили доказательства как зависимых от фосфорилирования, так и независимых эффектов cMyBP-C на сердечное сокращение и расслабление, и предположили, что связывающие взаимодействия с саркомерными белками, отличными от S2, могут быть важны для эффектов cMyBP-C.В этом отношении мы и другие показали, что N-конец cMyBP-C взаимодействует с актином (Куликовская и др., 2003; Разумова и др., 2006). Следовательно, будет интересно определить, опосредуют ли взаимодействия с актином, возможно, через C1 и m-домены функциональные эффекты cMyBP-C.

    Таким образом, мы показали, что комбинация C1 и уникального m-домена cMyBP-C вместе увеличивает Ca 2+ чувствительность к напряжению, увеличивает k tr при субмаксимальном [Ca 2+ ] и активируют натяжение в отсутствие Ca 2+ (pCa 9.0). Эти результаты предполагают, что эти два домена вместе составляют функциональную субъединицу cMyBP-C, которая способствует активации тонких филаментов. Будущие исследования будут направлены на идентификацию партнера (ов) по связыванию для C1 и мотива MyBP-C и определение механизмов, с помощью которых они влияют на взаимодействия актомиозина.

    © 2008 Разумова и др. Эта статья распространяется на условиях лицензии Attribution – Noncommercial – Share Alike – No Mirror Sites в течение первых шести месяцев после даты публикации (см. Http: // www.jgp.org/misc/terms.shtml). Через шесть месяцев он становится доступным по лицензии Creative Commons (Attribution – Noncommercial – Share Alike 3.0 Unported License, как описано на http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/).

    К.Л. Настоящий адрес Безольда и С.П. Харриса — кафедра нейробиологии, физиологии и поведения Калифорнийского университета, Дэвис, Дэвис, Калифорния 95616.

    Сокращения, использованные в этой статье: cMyBP-C, кардиальный миозин-связывающий белок C; MyBP-C, миозин-связывающий белок C.

    Фиброз сердца изменяет чувствительность к кальцию и релаксацию миофиламентов

    Фиброз сердца изменяет чувствительность к кальцию и расслабление миофиламентов — НАСА / ADS

    Сейчас на главной странице

    НАСА / ADS

    Сердечный фиброз влияет на чувствительность к кальцию и расслабление миофиламентов

    • Муссави-Харами, Фарид
    • ;
    • Разумова Мария Валерьевна
    • ;
    • Фаррис, Стивен
    • ;
    • Флинт, Галина Васильевна
    • ;
    • Олафссон, Соли
    • ;
    • Стечина, Сонетта
    • ;
    • Cheng Cheng, Yuanhua
    • ;
    • Ракка, Элис В.
    • ;
    • Stempien-Otero, апрель
    • ;
    • Ренье, Майкл

    Публикация:

    Биофизический журнал

    Дата публикации:
    Февраль 2016
    DOI:
    10.1016 / j.bpj.2015.11.1594
    Bibcode:
    2016BpJ … 110S.295M Разное

    Leave a Comment

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    Семейный блог Ирины Поляковой Semyablog.ru® 2019. При использовании материалов сайта укажите, пожалуйста, прямую ссылку на источник.Карта сайта