Триместры 2018: Каникулы по триместрам в 2018-2019 учебном году в школах России

Каникулы по триместрам в 2018-2019 учебном году в школах России

Обучение по триместрам появилось в российской образовательной практике относительно недавно. При таком подходе учебный год делится на равномерные учебные периоды, которые разграничиваются небольшими каникулами (длительностью до 7 дней). Этот принцип одобрен не только школьным руководством, но и психологами, так как школьники обучаются с меньшей интенсивностью – нагрузка распределяется равномерно, и ученики просто не успевают переутомиться, как бывает при традиционной учебе по четвертям, когда приходится посвящать изучению предметов по 2-3 месяца кряду.

Впрочем, главный вопрос, который волнует россиян, касается не организации учебного процесса, а сроков, на которые будут назначены каникулы. Школьникам хочется знать, когда можно будет отдохнуть от уроков и посвятить себя любимым хобби, а родители прикидывают, на какие дни нужно запланировать поездку к бабушке и дедушке, купить турпутевку или нанять няню, которая посидит с младшеклассником, пока мама и папа работают. Давайте узнаем, на какое время выпадут каникулы при обучении по триместрам в 2018/2019 учебном году!

Каникулы в 2019 году по триместровой системе

При обучении по триместрам 2018/2019 учебный год будет разделен на двенадцать частей — шесть рабочих и еще шесть, отведенных для отдыха (обычно каникулы длятся по неделе). Исключение составляют новогодние вакации (которые длятся столько же, сколько и у других школьников), а также время, отведенное для летних каникул (они являются самыми продолжительными).

Расписание каникул стоит отслеживать на сайте Минобразования РФ, специалисты которого опубликуют точные сведения в конце марта или начале апреля 2019 года. Впрочем, примерные даты вакаций можно прикинуть уже сегодня, так как принцип  «пять-шесть недель учебы на одну неделю каникул» остается неизменным. Можно предположить, что триместры придутся на такие даты:

• первый триместр – 01.09.2019-06.10.2018. Возможно, на 1 сентября будет назначена только линейка, так как это субботний день. Непосредственно уроки начнутся лишь 3-го числа;
• второй триместр – 14.10.2018-17.11.2018;
• третий триместр – 25.11.2018-29.12.2018;
• четвертый триместр – 09.01.2019-15.02.2019;
• пятый триместр – 25.02.2019-05.04.2019;
• шестой триместр – 15.04.2019-31.05.2019.

Точно также можно просчитать и каникулы. Опыт прошлых лет учебы вполне позволяет это сделать!

• Первые осенние вакации – 08.10.2018-13.10.2018;
• Вторые осенние вакации – 19.11.2018-24.11.2018;
• Первые зимние вакации – 28.12.2018-08.01.2019;
• Вторые зимние вакации – 18.02.2019-24.02.2019;
• Весенние вакации – 08.04.2019-14.04.2019;
• Продолжительные летние каникулы – 01.06.2019-31.08.2019.

Дополнительную информацию о периодах учебы и длительности каникул лучше уточнять в школе. После того как Минобразования опубликует приказ, руководство учебного заведения имеет право самостоятельно подобрать расписание для детей, которые в нем обучаются. На сегодняшний день администрациям школ Российской Федерации в этом вопросе даны широкие полномочия.

Единственное требование, которого директора и педсовет придерживаются в обязательном порядке, касается начала каникулярного времени – отдых должен начинаться в понедельник, а время начала вакаций нельзя отодвигать больше, чем на две недели от рекомендуемого времени. Еще одно правило гласит, что в течение учебного года ученики должны отдыхать на протяжении как минимум 30 календарных дней (не учитывая время, отведенное на летние вакации).

В каких случаях сроки каникул могут быть изменены?

Перенос даты начала или конца каникул, либо введение дополнительного периода отдыха также возможно. Причиной таких событий могут стать аномальные морозы (-25 градусов для младшеклассников, — 28 градусов – для учеников средней школы, -30 градусов – для старшеклассников). Серьезной причиной считаются также паводки (в районах, приближенных к рекам, озерам и другим водным пространствам, которые могут выйти из берегов), уменьшение температуры в классах (ниже +18 градусов) или введение карантинного режима (порог заболеваемости установлен на уровне 30% от всего числа учеников).

Триместры в школе 2018-2019 | каникулы по триместрам

Распределение учебного времени на триместры – относительно новый для российских школ подход к планированию процесса обучения школьников. Его главный принцип в том, что равные периоды учебы в течение года чередуются с недельным отдыхом. По мнению психологов и педагогов подобный подход позволяет избежать школьникам переутомления за счет равномерного распределения нагрузки, что особенно актуально в младшей школе.

Разделение учебного года

В традиционной образовательной системе год делится на 4 четверти, каждая из которых длится примерно 2-2,5 месяца и заканчивается каникулами. Исключение составляют новогодние праздники, на которые школьники получаю довольно длинный период отдыха, а также летние каникулы продолжительностью 3 месяца.

В условиях триместровой системы учебный год равномерно делится на 6 учебных периодов и такое же число каникул. Длительность каждого триместра обычно составляет 5-6 недель, а время отдыха после них -1 неделю.

Таким образом, процесс обучения по семестрам имеет циклический характер. Исключением является новогодний отдых, продолжительность которого такая же, как и в школах с более привычным обучением по четвертям. Неизменным при этом остается и отдых школьников в летнее время.

Министерство образования ежегодно вносит корректировки в учебный процесс за 6 месяцев до начала учебного года. В 2018-2019 учебном году график обучения по триместровой системе будет иметь следующий вид:

• 1-й: 1(3) сентября – 7 октября;
• 2-й: 15 октября – 18 ноября;
• 3-й: 26 ноября – 29 декабря.

• 4-й: 9 января – 17 февраля;
• 5-й: 25 февраля – 7 апреля;
• 6-й: 15 апреля – 31 мая.

Триместровые каникулы 2018-2019

Итак, рассмотрим, как будут распределены каникулы в школе в 2018-2019 году по триместрам:

• В первом осенние каникулы продлятся с 8 по 14 октября.
• Во втором отдых намечен с 19 по 25 ноября.
• В третьем школьников ждут “длинные выходные”, которые начнутся 30 декабря 2018 г. и закончится 9 января 2019 г.
• В четвертом каникулы начнутся 18 февраля и закончатся 24-го.
• В пятом каникулярное время обозначено в период с 8 по 14 апреля.
• В шестом ученики получают самый длинный и долгожданный летний отдых с 1 июня по 31 августа.

Данное распределение каникул для школ с триместровой формой обучения в 2018-2019 году поможет школьникам и их родителям заблаговременно спланировать личные мероприятия, особенно, когда предстоят дальние путешествия или другие значимые события. Но стоит учитывать, что при приведенные даты являются ориентировочными, поскольку школьное руководство вправе корректировать каникулярное время на 1-2 недели.

Рекомендации Министерства образования

В соответствии с приказом Минобразования каждое школьное учреждение самостоятельно выбирает как систему обучения (четвертную или триместровую), так и даты каникулярного времени.

При этом существуют обязательные требования, которых следует придерживаться по этому вопросу:

1. Каникулы должны начинаться в первый день недели – понедельник.
2. Дату начала нельзя смещать более, чем на 2 недели.
3. Суммарное количество дней отдыха для школьников не должно быть менее 30 (без учета летних каникул).

Таким образом, руководство школы самостоятельно определяет дни начала и окончания периодов отдыха своих учеников, не отступая от общих положений Министерства образования.

Возможные отклонения сроков

У школьников из разных городов России каникулы не всегда совпадают по датам и продолжительности. Региональные департаменты образования вправе корректировать сроки учебного процесса и отдыха в подведомственных школах, что может быть связано с разными причинами:

1. Ухудшением погодных условий (сильные морозы, паводки и т.д.).
2. Недостаточной температурой воздуха непосредственно в учебных помещениях. По нормам Минобразования запрещается проводить занятия в классах, где температура ниже 18°С.
3. Эпидемиями гриппа и других заболеваний, при которых порог превышается допустимый порог заболеваемости (более 30% общей численности учащихся), что требует закрытия учебного заведения на карантин.

На заметку: Во время морозов ниже 25°С прекращаются занятия для учеников младших классов, после -28°С – для средней школы, и при -30°С – для старшеклассников. Дополнительно также учитывается скорость ветра, которая усиливает действие морозного воздуха, что провоцирует сильные обморожения.

Если такие экстремальные перерывы занимают всего несколько дней, они обычно не влияют на темпы изучения школьной программы. Но если форс-мажорные условия затягиваются на неделю и дольше, школьное руководство вынуждено будет уменьшать продолжительность или смещать даты школьных каникул.

Читайте также:

Заметили опечатку на сайте? Мы будем благодарны вам, если вы выделите ее и нажмете Ctrl + Enter

Учебные периоды, ГБОУ Школа № 1210, Москва

Учебные периоды и сроки каникул на 2021-2022 учебный год.

На уровне начального общего образования (1 — 4 классы) учебный год делится на триместры.

В 1 классах

В 2-4 классах

На уровне основного общего образования (5 – 9 классы) учебный год делится на триместры.

На уровне среднего общего образования (10 – 11 классы) учебный год делится на полугодия.

Сроки каникул

30.10.2021 — 07.11.2021 – 9 дней

31.12.2021 — 09.01.2022 – 10 дней

19.02.2022 — 27.02.2022 – 9 дней

09.04.2022 — 17.04.2022 – 9 дней

Календарный учебный график на 2021-2022 учебный год

Статистика опроса

1.

Триместры в школе, по мнению многих педагогов, дают возможность сделать учебную нагрузку на школьников более равномерной. Разделение учебного года не на четверти, а на триместры – одно из самых заметных нововведений Министерства образования за последние годы. Суть такого деления в следующем: учебное время делится не на четыре, как в случае с четвертями, а на три равные части – триместры. Каждый период обучения заканчивается отдыхом – как и положено. Каникулы по триместрам тоже более равномерны, то есть длятся одинаковое время. При этом, однако, общая продолжительность учебы и каникулярного времени и в том, и в другом случае равны. То есть суммарно школьники, учащиеся по четвертям, проведут за партой ровно столько же дней, сколько и те школьники, кто учится по триместрам. То же самое происходит и в отношении отдыха – каникулы в школе по триместрам в сумме равны каникулам в школе по четвертям. Весь учебный год – с первого сентября по тридцать первое мая — делится на три триместра. Каждый из триместров, в свою очередь, разбит на две части, продолжительностью пять или шесть недель каждая. Учебные периоды отделены друг от друга неделей отдыха. Триместровые каникулы короче, чем при обучении по системам четвертей, зато периодов отдыха в течение учебного намного больше. Примерное распределение на 2017 — 2018 учебный год. Начало учебного года  1 сентября 2017 года. Периоды обучения: с 01.09.2017 по 30.09.2017 — 1 триместр (1 полугодие) с 09.10.2017 по 04.11.2017 — 1 триместр (1 полугодие) с 13.11.2017 по 30.12.2017 — 2 триместр (1 полугодие) с 11.01.2018 по 17.02.2018 — 2 триместр (2 полугодие) с 26.02.2018 по 07.04.2018 — 3 триместр (2 полугодие) с 16.04.2018 до окончания учебного года — 3 триместр (2 полугодие) Окончание 2017-2018 учебного года: 31 мая 2018 года для обучающихся 1-8, 10-х классов для обучающихся 9-х и 11-х классов 2017-2018 учебный год завершается в соответствии с расписанием экзаменов государственной итоговой аттестации и учебным планом Сроки каникул: с 01.10.2017 по 08.10.2017 с 05.11.2017 по 12.11.2017 с 31.12.2017 по 10.01.2018 с 18.02.2018 по 25.02.2018 с 08.04.2018 по 15.04.2018 с 01.06.2018 по 31.08.2018 

Считаю целесообразным переход на обучение по триместрам

Считаю целесообразным обучение по четвертям

Итоги номинации «Дисциплина» II триместр «Зима» 2018-19 г.

/kafedra-vospitanija/itogi/itogi-nominacii-disciplina-ii-trimestr-zima-2018-19-g/

Объединение S-70

Итоги 2 триместра 2018-2019 учебного года

15 учебных недель содержит второй годовой триместр! Самый продолжительный и богатый на события. В этой статье мы подводим его итоги. 
Так долго учиться, конечно, нелегко, пусть даже половинки триместра и разделяют новогодние каникулы, но наши ученики успешно справились со всеми учебными задачами: хорошо сдали академические концерты и технические зачёты, достойно справились и с контрольными работами. Поэтому из 53 обучающихся у нас 44 ударника и 8 отличников. С одними пятёрками закончили этот триместр Буторина Валерия (0 класс), Карнаухова Анна и Опарина Маргарита (2 класс), Кропачева Юлия и Лузянина Варвара (3 класс), Возисов Степан (4 класс), Морозова Анастасия (5 класс) и Папырина Елизавета (6 класс). Поздравляем! 
Мы не только учимся, но и ведём очень активную жизнь, участвуем в конкурсах и сами проводим мероприятия. О них вы можете узнать в предыдущих статьях, а в этой мы расскажем, чем же школа отличилась в последний учебный месяц. В феврале впервые прошёл конкурс рисунков по  музыке П.И. Чайковского для учащихся младших классов. Участники конкурса передавали музыкальный образ любимых пьес. Все работы были собраны на выставке, и каждый мог проголосовать за понравившийся рисунок. Абсолютным победителем по мнению школьников и участников нашей интернет-группы была признана «Баркарола»  Марии Альгиной.  
1 марта Мария Александровна Гонина со своими ученицами отправились в Советск для участия в межрайонной олимпиаде по слушанию музыки, посвящённой творчеству французского композитора Камиля Сен-Санса. Участники олимпиады писали видеовикторину по циклу «Карнавал животных», выполняли анализ нотного текста пьесы из цикла и решали музыкальный кроссворд. В результате победителями олимпиады стали Опарина Маргарита (2 класс) и Тюлькина Полина (3 класс), второе место завоевала Кропачева Юлия (3 класс), а Кадесникова Ольга (1 класс) и Буторина Александра (2 класс) заняли третьи места в своих возрастных группах. Сама же Мария Александровна приняла участие в межрайонном конкурсе для педагогов «Моя методическая копилка» и стала лауреатом в номинации «Выставка дидактических материалов», представив комплекс презентаций и рабочую тетрадь по теории музыки для подготовительного класса. 
Вечером первого весеннего дня родители наших учеников собрались на праздничный концерт. И пусть выступающих в силу определённых обстоятельств было немного, концерт всё равно получился ярким и душевным. Отлично дебютировали на сцене солистки Пасютина Лилия, Тюлькина Анастасия, квартет учениц Елены Николаевны Гониной. Нулевики держались на сцене так же уверенно, как и старшие ученики. Понравилась зрителям поучительная и забавная сценка о том, для чего же маме нужны дети. А особо тёплые эмоции вызвал ансамбль девочек, исполнивший народную песню «А я молода», и маленькая «хозяюшка» Лера Масленикова, накрывавшая на стол и угощавшая зал сладкими пирожками. 
4 марта мы отметили «Встречу Масленицы» в Заречном парке на традиционном Дне Здоровья, и теперь у нас начались прекрасные долгожданные каникулы!

test-title-liski

Ваше имя и фамилия

Адрес электронной почты

Номер телефона

Фамилия и имя ребенка

Возраст(полных лет)

Пол МужскойЖенский

Фамилия и имя ребенка

Возраст(полных лет)

Пол МужскойЖенский

Фамилия и имя ребенка

Возраст(полных лет)

Пол МужскойЖенский

Фамилия и имя ребенка

Возраст(полных лет)

Пол МужскойЖенский

Фамилия и имя ребенка

Возраст(полных лет)

Пол МужскойЖенский

2018 Даты триместра | Студенты

Дородовая помощь: посещения во 2-м триместре

Пренатальный уход: посещения во втором триместре

Целью дородового ухода является обеспечение того, чтобы вы и ваш ребенок оставались здоровыми на протяжении всей беременности. В идеале дородовой уход начинается, как только вы думаете, что беременны. Ваш лечащий врач может назначить приемы дородового наблюдения каждые четыре недели на протяжении второго триместра.

Вот чего следует ожидать на приеме у врача во втором триместре беременности.

Обзор основных операций

Ваш лечащий врач будет проверять ваше кровяное давление и вес при каждом посещении.Поделитесь любыми проблемами, которые у вас есть. Тогда настало время, чтобы ваш ребенок занял центральное место. Ваш лечащий врач может:

• Отслеживайте рост вашего ребенка. Измеряя расстояние от лобковой кости до верхней части матки (высоту дна матки), ваш лечащий врач может измерить рост вашего ребенка. После 20 недель беременности это измерение в сантиметрах часто совпадает с количеством недель беременности плюс-минус 2 сантиметра.
• Слушайте сердцебиение вашего ребенка. При посещении во втором триместре вы можете услышать сердцебиение вашего ребенка с помощью допплеровского инструмента. Инструмент Доплера обнаруживает движение и передает его в виде звука.
• Оцените шевеление плода. Сообщите своему врачу, когда вы начнете замечать трепетание или удары ногой. Имейте в виду, что матери замечают эти движения в разное время, и движение в этот период беременности обычно непредсказуемо. Скорее всего, вы впервые заметите трепетание на сроке от 18 до 20 недель беременности.

Также поговорите со своим врачом о любых вакцинациях, которые могут вам понадобиться.

Рассмотреть возможность пренатального тестирования

Во втором триместре вам могут предложить различные пренатальные обследования или тесты:

• Генетические тесты. Могут быть предложены анализы крови для выявления генетических или хромосомных заболеваний, таких как расщелина позвоночника или синдром Дауна. Если ваши результаты ненормальны или вызывают беспокойство, ваш врач порекомендует диагностический тест, обычно амниоцентез.Во время амниоцентеза образец жидкости, которая окружает и защищает ребенка во время беременности, извлекается из матки для тестирования.
• УЗИ плода. Ультразвук плода — это метод визуализации, который использует высокочастотные звуковые волны для получения изображений ребенка в матке. Подробное ультразвуковое исследование может помочь вашему лечащему врачу оценить анатомию плода. Ультразвук плода также может дать вам возможность узнать пол ребенка.
• Анализы крови. В период с 24 по 28 неделю беременности могут быть предложены анализы крови для проверки анализа крови и уровня железа, а также для выявления диабета, который может развиться во время беременности (гестационный диабет). Если у вас резус-отрицательный результат в крови — наследственная черта, которая относится к определенному белку, обнаруженному на поверхности эритроцитов, — вам может потребоваться анализ крови для проверки на наличие антител Rh . Эти антитела могут развиваться, если у вашего ребенка кровь с положительным результатом Rh и ваша кровь с отрицательным Rh смешивается с кровью ребенка.Без лечения антитела могут проникать через плаценту и атаковать красные кровяные тельца ребенка — особенно при последующей беременности ребенком с положительным результатом Rh в крови.

Сообщите своему врачу

Второй триместр часто приносит обновленное чувство благополучия. Утреннее недомогание обычно начинает проходить. Вы начинаете чувствовать, как ребенок двигается. Ваш живот становится более заметным. Много чего происходит.

Сообщите своему врачу, о чем вы думаете, даже если это кажется глупым или несущественным.Когда речь заходит о вашем здоровье или здоровье вашего ребенка, нет ничего тривиального.

1. Lockwood CJ, et al. Пренатальный уход: первоначальная оценка. https://www.uptodate.com/contents/search. По состоянию на 9 июля 2018 г.
2. Пренатальная помощь и тесты. Управление по женскому здоровью. http://www.womenshealth.gov/pregnancy/you-are-pregnant/prenatal-care-tests.html. По состоянию на 9 июля 2018 г.
3. Cunningham FG, et al., Eds. Наблюдение за беременной женщиной.В: Акушерство Уильямса. 25-е ​​изд. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: образование McGraw-Hill; 2018. https: // accessmedicine.mhmedical.com. По состоянию на 9 июля 2018 г.
4. Lockwood CJ, et al. Пренатальный уход: второй и третий триместры. https://www.uptodate.com/contents/search. По состоянию на 9 июля 2018 г.
5. Американский колледж акушеров и гинекологов (ACOG) Комитет по практическим бюллетеням — акушерство. Бюллетень практики ACOG № 101: Ультрасонография при беременности. Акушерство и гинекология.2009; 113: 451. Подтверждено 2014.

Продукция и услуги

1. Книга: акушерство
2. Книга: Руководство клиники Мэйо по здоровой беременности

.

Одноклеточное исследование плаценты и децидуальной оболочки человека в первом триместре

ВВЕДЕНИЕ

Здесь мы выполнили анализ секвенирования одноклеточной РНК (scRNA-seq) плацентарных и децидуальных клеток человека в первом триместре с использованием платформ 10x Genomics (обозначаемых как 10x) и Drop-seq. Мы определили сигнатуры генов, ключевые факторы транскрипции (TF) и широко экспрессируемые рецепторы и лиганды для каждого типа клеток ворсинок и децидуальной оболочки. Мы выделили покоящийся и высокопролиферативный подтип ворсинок и децидуальной оболочки и обнаружили ранее неизвестные подтипы FB-подобных клеток. Вместе мы составили комплексную карту типов клеток в плаценте и децидуальной оболочке человека в первом триместре.

ОБСУЖДЕНИЕ

Таким образом, наш анализ дал определения транскриптомов 20 основных популяций клеток (9 из ворсинок и 11 из децидуальной оболочки), понимание сложного и многоуровневого регуляторного кода для поддержания дифференцированных клеток и карту взаимодействия между наиболее широко экспрессируемыми лигандами и рецепторы внутри ворсинок и между типами клеток децидуальной оболочки и между ними.Наш анализ также выявил неожиданную сложность клеточного подтипа внутри каждого типа ткани, включая присутствие различных популяций FB в плаценте и децидуальной оболочке. Это исследование послужит руководством для будущего молекулярного выяснения динамических изменений внутри плаценты и децидуальной оболочки и между ними, а также улучшит наше понимание того, как нарушение регуляции этих процессов, включая генетические изменения, может привести к выкидышу и осложнениям беременности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Сбор и диссоциация тканей

Образцы тканей для выборочного прерывания беременности в первом триместре были получены либо посредством ручной вакуумной аспирации, либо путем дилатации и кюретажа и временно помещены в холодную воду.Гестационный мешок, ворсинки хориона, децидуальная оболочка и сгустки крови были идентифицированы микроскопически. Ворсинки хориона и децидуальная оболочка были разделены с помощью пинцета и ножниц, а затем доставлены в лабораторию в фосфатно-солевом буфере (PBS) при температуре 37 ° C. Для диссоциации клеток 200 мкл свежеприготовленного раствора для диссоциации, состоящего из либеразы TL (2 мг / мл; Sigma-Aldrich) и 1800 мкл PBS, добавляли к 0,1–0,3 г образцов ткани и инкубировали при 37 ° C в течение 15 мин. Затем ткань вручную дезагрегировали с помощью 2-миллилитрового шприца с иглой 16-го размера, осторожно вытягивая раствор вверх и вниз 10 раз, после чего следовали еще два раунда пункционной аспирации с 15-минутными интервалами, теперь с использованием иглы 18-го размера. .После этого добавляли 2 мл фетальной бычьей сыворотки (FBS), и клетки пропускали через клеточный фильтр Falcon 40 мкм (# 352340, Corning) и собирали центрифугированием при 300 g в течение 5 минут. Клетки промывали один раз и ресуспендировали в 100 мкл свежеприготовленного PBS – бычьего сывороточного альбумина (BSA) (1 × PBS и 0,04% BSA). Жизнеспособность клеток оценивали с использованием метода исключения трипанового синего (# 1450013, Bio-Rad) на автоматическом счетчике клеток TC20 (Bio-Rad). Ворсинки Placenta_23 обрабатывали как на Drop-seq, так и на 10-кратной платформе, поскольку образец давал достаточное количество клеток.Для децидуальной плаценты_22 мы обработали два разных образца ткани (ID: P2D_DS и P5D_DS) от одного и того же человека.

Захват отдельных клеток, подготовка библиотеки и секвенирование

Bulk RNA-seq и анализ

Замороженную ткань (350 мг) послеродовой плаценты первого срока в 2-мл микроцентрифужных пробирках лизировали измельчением (MM301, RETSCH Mill) в течение 5 минут при 27 циклах / с с использованием 3-мм вольфрама Карбидные шарики (# 69997, QIAGEN) в 359 мкл буфера ED2S [36 мМ лимонная кислота, 44 мМ NaOH, 0.4% (мас. / Об.) Сакозила, 1,5 М гуанидин изотиоцианат, 183 мМ NaCl и 48 мМ 2-меркаптоэтанол в феноле]. После лизиса суспензию центрифугировали при 13000 г , 1 мл супернатанта переносили в новую пробирку и 298 мкл PBSP [125 мкл 30% (мас. / Об.) Додецилсульфата натрия, 66 мМ трис-HCl ( pH 7,5), добавляли 19,8 мМ EDTA, 265 мМ 2-меркаптоэтанол (pH 8,0) и 175 мкл PBS] с последующим перемешиванием, инкубацией при 60 ° C в течение 90 секунд и охлаждением на льду в течение 90 секунд. Разделение фаз индуцировали добавлением 126 мкл хлороформа, встряхиванием и вращением при 21000 г в течение 5 минут при комнатной температуре.Водный супернатант (650 мкл) переносили в новую пробирку и 1300 мкл VB2G [98,2% изопропанола, 7,2 мМ MgCl ₂ , 2,4 мМ CaCl ₂ , 1 М тиоцианата гуанидиния (GITC) и 5,0 мМ трис ( 2-карбоксиэтил) фосфин (TCEP)] с последующей загрузкой образца в спин-колонки QIAGEN RNAEasy MiniElute с использованием вакуумного коллектора. После загрузки колонки дважды промывали 970 мкл буфера EWL (18 мМ NaCl, 2,7 мМ MgCl ₂ , 0,9 мМ CaCl ₂ , 0,5% Triton X-100, 360 мМ GITC и 5 мМ TCEP), один раз. с 970 мкл 100% (об. / об.) этанола и дважды по 500 мкл 80% (об. / об.) этанола.Мембраны сушили центрифугированием при 17000 g в течение 5 минут, и образцы элюировали 20 мкл 10 мМ трис-HCl (pH 7,4) центрифугированием в тех же условиях. Общую РНК (100 нг) использовали для создания библиотек РНК-seq с использованием набора LT для многонитевой мРНК Illumina TruSeq. Библиотеки денатурировали и секвенировали на секвенаторе Illumina HiSeq 2500 для создания считываний парных концов длиной 101 п.н.

Объемный анализ RNA-seq выполняли с использованием стандартного конвейера RNA-seq. Вкратце, после контроля качества считанные данные были сопоставлены с эталоном генома человека (hg38) с использованием выравнивателя STAR (STAR_2.5.1а), допускающие не более трех несовпадений. Подсчет генов был произведен с использованием функции featureCounts в пакете R / Bioconductor «Rsubread» с последующим вычислением TPM.

Обработка данных scRNA-seq

Канонический корреляционный анализ, выравнивание по Сера и визуализация t-SNE.

Проверка антител для иммуноокрашивания

Для клонирования конструкций со сверхэкспрессией лентивируса сначала кДНК REN (ренина) дикого типа была клонирована в плазмиду pLenti-C-Myc-DDK-IRES-Puro (OriGene) путем переваривания Asc I и Mlu I.Для продукции лентивируса 5 × 10 ⁵ клеток эмбриональной почки человека (HEK) 293T / 17 культивировали в одной лунке шестилуночного планшета в среде Игла, модифицированной Дульбекко с высоким содержанием глюкозы, с добавлением 10% (об. / Об.) FBS. . Через 24 часа после посева клетки HEK293T / 17 трансфицировали с использованием липофектамина 2000 (11668019, Thermo Fisher Scientific) и 1,2 мг плазмиды pLenti-C-Myc-DDK-IRES-Puro-REN, 1,2 мг psPAX2 (# 12260 , Addgene) и 0,8 мг упаковывающей плазмиды pMD2.G (# 12259, Addgene).Через 48 часов после трансфекции супернатант, содержащий вирусные частицы, собирали, очищали центрифугированием при 500 g в течение 10 минут и фильтровали (45 мм; 09-720-005, Thermo Fisher Scientific). Титр вируса оценивали с помощью набора Lenti-X GoStix Kit (# 631244, Clontech). Для вирусной трансдукции клетки Flp-In 293 T-Rex инфицировали вирусом при множественности инфицирования ~ 0,4 и ~ 1. Трансдуцированные лентивирусом клетки отбирали пуромицином (2 мг / мл) через 2 дня после вирусной инфекции.Экспрессию C-концевого белка REN, меченного Myc-DDK, подтверждали вестерн-блоттингом с использованием антитела против MYC.

Иммуноокрашивание осадка клеток и ткани плаценты

Осадок клеток фиксировали в 4% параформальдегиде в течение ночи при комнатной температуре и обрабатывали для заливки парафином с использованием тканевого процессора Leica ASP6025 (Leica Biosystems). Свежесрезанные парафиновые срезы размером 5 мкм окрашивали на поликлональный ренин (5 мкг / мл; # AF4090, R&D Systems) в течение 1 часа и с использованием 10 мин обнаружения тирамида Alexa Fluor 488 (# T20948, Life Technologies) в течение 10 минут на Leica Bond. Протокол F.Срезы предварительно обрабатывали буфером Leica Bond ER2 (Leica Biosystems) в течение 20 минут при 100 ° C перед окрашиванием.

Ткани ворсин плаценты в первом триместре беременности фиксировали 10% нейтральным забуференным формалином (Azer Scientific) при комнатной температуре в течение 24 часов. Образцы переносили в 70% этанол с последующей заливкой парафином. Свежесрезанные парафиновые срезы 5 мкм окрашивали для последовательной двойной иммунофлуоресценции на Leica Bond RX (Leica Biosystems) мышиным моноклональным виментином (0,05 мкг / мл; # VP-V684, Vector Labs) в течение 1 часа и с использованием 10 мин 1: 200. Обнаружение тирамида Alexa Fluor 647 (# T20951, Life Technologies) по протоколу Leica Bond Protocol F, за которым следует поликлональный ренин (0.2 мкг / мл; каталог нет. AF4090, R&D Systems) в течение 1 часа и с использованием 10 мин детектора тирамида Alexa Fluor 488 (# T20948, Life Technologies) 1: 200 по протоколу Leica Bond F. Срезы предварительно обрабатывали буфером Leica Bond ER2 (Leica Biosystems) в течение 20 минут. при 100 ° C перед каждым окрашиванием. Изображения были записаны на Olympus VS110 и обработаны с помощью программного обеспечения Visiopharm Integrated Systems.

Анализ фетального и материнского происхождения

Для этого анализа использовались только образцы плодов мужского пола, а образцы плодов женского пола (P3V_DS, P2D_DS и P5D_DS) были удалены, чтобы облегчить определение типов клеток эмбрионального и материнского происхождения.Матрицы экспрессии генов использовали для выполнения CCA, выравнивания по Сера и кластеризации t-SNE, как описано ранее. Экспрессия генов, кодируемых Y-хромосомой ( DDX3Y и EIFAY ), использовалась для определения фетального происхождения, тогда как экспрессия гена XIST использовалась для определения материнского происхождения.

Анализ экспрессии гена FB

Средняя экспрессия гена была рассчитана для каждого подтипа FB. Затем каждое выражение подтипа было нормализовано до 10 000 для создания значений, подобных TPM, с последующим преобразованием в журнал ₂ (TPM + 1).Логарифмически преобразованные значения для объединения 60 лучших генов, экспрессируемых в каждом кластере клеток, использовали для выполнения иерархической кластеризации с помощью pheatmap в R с использованием мер евклидова расстояния для кластеризации.

Анализ TF

Анализ онтологии генов

Анализ карты диффузии стромальных клеток децидуальной оболочки

Мы провели кластерный анализ Сера на 1524 стромальных клетках (DSC, FB1 и FB2) образца P6D_10x и идентифицировали 1751 вариабельный ген (FindVariableGenes).Мы использовали преобразованную в логарифмическую форму матрицу экспрессии генов вариабельных генов для создания карты диффузии с помощью пакета destiny R. Чтобы идентифицировать гены в псевдовремя, мы использовали упрощенный подход, используя только первую координату (DC1) карты диффузии. Мы разделили диапазон координаты DC1 на 50 бинов равной длины и вычислили м _i , k, средний лог ₂ (TPM + 1), для каждого _i -го гена и j -я комбинация ячеек попадает в ячейку k -го.Мы отфильтровали гены, для которых m _i , max ≤ 1, m _i , max = max ( m _{i , 1} , m _{i , 2} ,…, м _{i , k} ). Для демонстрации мы выбрали 50 лучших вариабельных генов путем сортировки по σ _i ² , дисперсии для m _{i , k} для _i -го гена среди всех бункеров.Порядок генов определялся индексом Med _i (медиана для m _{i , k} ), отсортированных по возрастанию. Стандартная оценка или оценка Z , z _i = ( m _{i , k} — M _k ) / σ _{i , где M k = среднее ( m i , 1 , m i , 2 ,…, m i 904 9045, ), рассчитывали для каждого гена отдельно.}