Т спот тест на туберкулез: Серологическая диагностика туберкулеза методом T-SPOT.TB

Т-SPOT (инфицирование М. tuberculosis) — сдать анализ в Уфе

Подготовка к иследованию

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую неминеральную и негазированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются. ВАЖНО: Проба Манту не влияет на результат теста T-SPOT, поэтому его можно проводить независимо от постановки пробы После Диаскин-теста, T-SPOT можно проводить не ранее, чем через 2 месяца. Во время ОРЗ может отмечаться неспецифическая реакция, которая мешает оценке результата. Поэтому предпочтительно делать тест T-SPOT не ранее, чем через 1 месяц после выздоровления.

Описание

В клинико-диагностической лаборатории «МедиаЛаб» проводится SPOT-тест на туберкулез. Методика позволяет получить точные сведения о состоянии здоровья пациента, поставить диагноз и начать правильное лечение. Проводим анализы быстро, используемые методы помогают получить корректные данные.

Особенности проведения исследования T-SPOT

Этот метод хорошо зарекомендовал себя в разных странах мира. Он применяется потому что помогает диагностировать внеглоточные формы туберкулеза с минимальными затратами времени, а также с точностью до 99,9%.

Т-SPOT тест в Уфе применяется для того, чтобы диагностировать поражение туберкулезом различных частей организма:

  • Костей.
  • Кожи.
  • Глаз.
  • Мозговых оболочек.
  • Суставов.
  • Мочеполовых органов и других.

Методика безопасна, анализ выполняется быстро. Метод получил одобрение  многих контролирующих организаций.

Когда нужно сдавать анализ

Проявления внеглоточного туберкулеза отличаются в зависимости от органа, который поражает такая болезнь. Среди наиболее распространенных симптомов:

  • Общая ослабленность организма.
  • Постоянные проявления недомогания.
  • Небольшое повышение температуры тела.
  • Внезапная потеря веса.
  • Боли с локализацией в зависимости от пораженного участка.

Проблема этого варианта туберкулеза заключается в сложности его диагностирования. Часто возникают ситуации, когда заболевание может маскироваться под другие.

Кроме внеглоточного туберкулеза, можно также использовать средство для выявления легочной и латентной формы инфекции.

Как проводится исследование

Анализ T-SPOT не требует никакой специальной подготовки. У пациента берется кровь. Последний прием пищи должен быть не менее чем за 4 часа до этого. Запрещено пить любые напитки кроме неминеральной и негазированной воды.

Результаты готовятся в минимальные сроки. При необходимости, врач может рекомендовать выполнять такое обследование не менее одного раза в шесть месяцев.

Делать тест можно как по направлению от вашего лечащего врача, так и по личной инициативе.

Мы гарантируем соблюдение всех санитарных требований, безопасное и быстрое взятие крови. Используем качественное оборудование для конкретизации результата. Также готовы ответить на другие интересующие вас вопросы. Чтобы связаться с нами, оставьте заявку на сайте или звоните.

Адреса офисов где вы можете сдать анализ

✔Диагностика туберкулеза методом Т-СПОТ — цена от 5000 руб, анализ T-SPOT в Москве

От 11 и более человек (выезд медсестры, в пределах МКАД)T-spot на дому+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)+2000 руб (+500 руб за каждые 5 человек)

Диагностика туберкулеза методом T-SPOT.TB теперь в нашей клинике

Возбудителем туберкулеза является микобактерия туберкулеза (mycobacterium tuberculosis, палочка Коха, туберкулезная палочка) – агрессивный и устойчивый микроорганизм. Микобактерия способна длительное время выживать в неблагоприятных условиях (в высушенной мокроте, в почве, на загрязненных предметах).

По данным ВОЗ в 2014 году 9,6 миллионов человек заболели туберкулезом, среди заболевших один миллион составили дети от 0 до 14 лет.

Основной механизм передачи туберкулеза легких – воздушно-капельный. При кашле, чихании или отхаркивании люди с легочным туберкулезом выделяют в воздух микобактерии. Для инфицирования человеку достаточно вдохнуть лишь незначительное количество таких бактерий. Однако существует возможность заражения посредством пищевых продуктов или при контакте с предметами зараженными возбудителем туберкулеза.

Необходимо пройти обследование на туберкулез, если у вас есть следующие симптомы: 1. Кашель более 3 недель иногда с мокротой и кровью

  1. Боль в груди
  2. Температура 37-38˚С
  3. Ночная потливость, слабость

Около трети всего населения являются инфицированными микобактериями туберкулёза и имеют латентную форму туберкулеза. Пациенты с латентным туберкулёзом не заразны. Риск того, что люди, инфицированные микобактериями туберкулеза, заболеют им на протяжении своей жизни, составляет 10%. Однако люди с ослабленной иммунной системой, такие как ВИЧ- инфицированные пациенты, люди с недостаточностью питания или сахарным диабетом или курильщики, дети подвергаются гораздо более высокому риску заболевания.

При латентном туберкулезе, как правило, на рентгенограмме легких не имеется никаких

изменений. И методами диагностики латентной туберкулезной инфекции до недавнего времени являлись только кожные тесты — проба Манту и Диаскинтест. Но кожные тесты имеют ряд ограничений.

Противопоказания к проведению кожных тестов

  • Острые и хронические (в период обострения) инфекционные заболевания, за исключением случаев, подозрительных на туберкулез;
  • Соматические заболевания в период обострения;
  • Распространенные кожные заболевания;
  • Аллергические состояния;
  • Эпилепсия.

Т-SPOT.TB – инновационный тест диагностики туберкулеза по анализу крови

  • Высокая чувствительностью    и    специфичность    обеспечивают    высокую    точность результатов
  • Отсутствие противопоказаний и побочных реакций
  • Тест выбора у пациентов с противопоказаниями к проведению кожных тестов
  • Отсутствие ложных результатов у вакцинированных БЦЖ
  • Возможность использования у «проблемных» групп пациентов
  • Получение результата на следующий день!
  • Включен в федеральные клинические рекомендации Российского общества фтизиатров

T-SPOT.TB вошел в новые Федеральные клинические рекомендации «Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях», утвержденные Российским обществом фтизиатров в 2017г

T-SPOT.TB — иммунологический способ диагностики туберкулеза.

Название T-SPOT.TB расшифровывается так:

  • литера T обозначает T-лимфоциты, клетки крови, на основе ответа которых производится исследование
  • Слово SPOT это перевод с английского языка, означающий «пятно». В результате лабораторного опыта в лунке образуются пятна, каждое из которых маркирует Т-лимфоцит.
  • TB это сокращенное международное обозначение туберкулеза.

В России использование методики Т-СПОТ утверждено в 2012 году ФЗ — 2012/648.

Этот способ определения носительства туберкулеза очень

чувствителен и информативен, он позволяет исключить ложноположительные реакции на носительство микобактерии туберкулеза в случаях, когда большинство тестов ошибаются или неточны. По разным оценкам и в разных регионах земного шара чувствительность T-SPOT.ТВ оценивается около 98%.

КАК ДОСТИГАЕТСЯ ВЫСОКАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ T-SPOT

T-SPOT.TB является in vitro диагностическим тестом, основанный на выявлении секреции интерферона-гамма лимфоцитами, стимулированными специфическими антигенами Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 и CFP-10. В тесте определяется число Т-клеток, отвечающих  на стимуляцию антигенами ESAT-6 и CFP10. Эти антигены не выявляются во всех штаммах БЦЖ и у представителей семейства нетуберкулезных микобактерий. Напротив, у людей, инфицированных туберкулезными микобактериями (M.tuberculesis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canetti) в крови выявляются Т-клетки, распознающие эти и иные антигены.

Все это позволило T-SPOT.ТВ стать надежным и высокоинформативным методом диагностики как латентного, так и активного туберкулеза. Высокая точность диагностики позволяет избежать ненужных и зачастую вредных лечебных курсов и исследований.

ПРЕИМУЩЕСТВА ТЕСТА T-SPOT.ТВ ПЕРЕД КОЖНЫМИ ПРОБАМИ

  • Высокая специфичность и высокая чувствительность.
  • Отсутствие противопоказаний и ограничений
  • Безопасность теста, отсутствие побочных реакций
  • Не имеет противопоказаний и ограничений по времени проведения;
  • Не дает ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
  • Тест выбора при наличии противопоказаний к проведению кожных проб;
  • Получение результата на следующий день

КОГДА ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНО ИСПОЛЬЗОВАТЬ ТЕСТ T-SPOT.ТВ

  • У детей, в случае противопоказания проведения кожных тестов: аллергические заболевания, кожные заболевания, эпилепсия, острые и обострение хронических заболеваний
  • У детей в случае токсико-аллергических реакций на туберкулин
  • У детей, привитых БЦЖ, у которых выявлено ложноположительная реакция Манту.
  • У людей, посетивших страны с высоким уровнем заболеваемости туберкулезом (Африка, Азия)
  • У беременных в случае контакта с больным туберкулезом или наличия симптомов;
  • У лиц, контактирующих с больным туберкулезом;
  • У пациентов на ФНО-ɣ терапии
  • У ВИЧ-инфицированных
  • При подозрении на внелегочные формы туберкулеза
  • В случае отказа родителей от проведения кожных тестов NB! Вакцинация БЦЖ не влияет на результаты теста T-SPOT.

КАК ПОДГОТОВИТЬСЯ К СДАЧЕ АНАЛИЗА

Для проведения теста проводится забор крови из вены натощак.

Диагностика и лечения туберкулеза в клинике Семашко

Работаем без выходных и праздников

Врачами ДЦДЛ разработаны программы диспансеризации и наблюдения за здоровьем детей и взрослых  с учетом возраста, образа жизни, а также гендерных различий. 

Стоимость программ рассчитывается по специальным тарифам со скидкой 30% и остается неизменной в течение всего срока действия договора. Подробнее….

Фтизиатрия – раздел клинической медицины, предметом изучения которого являются причины возникновения, механизмы развития, распространения такого заболевания, как туберкулез, а также вопросы диагностики, лечения и профилактики туберкулеза.

Развитию заболеванию способствует бытовой контакт с больным туберкулезом, неполноценное питание, стрессы, недостаточный сон, нерегламентированное чередование работы и отдыха.

Современные методики диагностики и лечения, применяемые врачами-фтизиатрами, позволяют обнаружить болезнь на ранней стадии. Опасность туберкулеза заключается в том, что в течение длительного времени болезнь может проходить бессимптомно, без явных клинических проявлений, приводя к распространению процесса и инфицированию окружающих. Туберкулез поражает не только легкие, но и любые органы и опорно-двигательный аппарат человека, кожу. Поэтому и симптомы заболевания могут быть разнообразными.

В случае положительной реакции Манту у детей важна дифференциальная диагностика таких состояний как поствакцинальная аллергия и инфицированность туберкулезом. Решением вопроса о наличии или отсутствии заболевании туберкулезом, т.е. постановкой диагноза туберкулез, занимается врач-фтизиатр.

С целью профилактики и диагностики туберкулеза используются следующие методы:

  • Клинические методы (осмотр врача-фтизиатра, клинические анализы крови и мочи)
  • Туберкулиновые пробы

Дополнительные лабораторные тесты (Диаскинтест, T-SPOT-TB тест ) по показаниям.

  • Определение в крови антител к возбудителям туберкулеза
  • Бактериологические исследования мокроты, мочи и т.д.
  • Рентгенография, флюорография органов грудной клетки
  • УЗИ внутренних органов по показаниям

Впервые выявленная у ребенка положительная проба Манту – повод обратиться к фтизиатру для уточнения причины. В этих случаях врач решает вопрос о необходимости обследования его ближайшего окружения.  

При выявлении больного туберкулезом в вашем окружении необходимо пройти обследование врача-фтизиатра. В случае подтверждения диагноза туберкулеза лечение следует начать немедленно!

Выезд врачей на дом осуществляется по Москве и Подмосковью.

Цены

Уважаемые пациенты! Стоимость приема конкретного врача уточняйте в регистратуре.

  • Анализы
  • Диагностика
  • УЗИ
  • Процедуры

Собственная клинико-диагностическая лаборатория Центра Семашко выполняет исследования в области биохимии, иммунологии, инфекционной иммунологии, аллергологии, гемостаза и реологии крови, исследует гормоны и многие другие показатели. Разнообразные клинические лабораторные исследования (анализ крови, мочи, кала, различных мазков) выполняются в течение дня с 8:30 до 19:00.

Перейти к прайс-листу…

Эффективность и ограничения T-SPOT.TB для диагностики ТБ в условиях высокой распространенности — Zhu

Введение

Туберкулез (ТБ) представляет серьезную глобальную угрозу для здоровья человека. Согласно отчету Всемирной организации здравоохранения, в 2011 г. было зарегистрировано около 8,7 млн ​​новых случаев ТБ [13% коинфицированы вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)] и 1,4 млн человек умерли от ТБ (1). Сложность диагностики сдерживает прогресс в профилактике и борьбе с ТБ.В качестве классического иммуноанализа туберкулиновая кожная проба (ТКП) уже давно широко используется в диагностике туберкулеза, однако метод отличался низкой специфичностью и точностью, в основном из-за перекрестных реакций туберкулиновых очищенных белковых производных. (ППД) с индуцированной БЦЖ (2-4). Недавно тест T-SPOT.TB показал более высокую эффективность в диагностике туберкулеза. Анализ T-SPOT.TB представляет собой упрощенный метод иммуноферментных пятен (ELISPOT), который предназначен для обнаружения эффекторных Т-клеток, которые реагируют на стимуляцию специфическими антигенами [ранние секретируемые антигены-мишени 6 кДа (ESAT-6) и культуральные белок фильтрата 10 кДа (CFP10)] для Mycobacterium tuberculosis (MTB) (3,5-9).ESAT-6 и CFP10 присутствуют только в MTB, но отсутствуют в штаммах бациллы Кальметта-Герена (BCG), что обеспечивает теоретически высокую специфичность анализа T-SPOT.TB. Предыдущие отчеты показали, что анализ T-SPOT.TB может быть более точным индикатором наличия ЛТБИ и активного ТБ (АТБ), однако большинство этих исследований проводились в условиях низкой распространенности (10–14). Поэтому важно оценить диагностическую ценность T-SPOT.TB для конкретных групп населения в условиях высокой распространенности.В настоящем исследовании мы провели стратифицированный и сопоставимый анализ, чтобы изучить клиническую ценность и ограничения анализа T-SPOT.TB для диагностики ТБ в условиях высокой распространенности ТБ в Китае, одной из 22 стран с высоким бременем (1).


Исследуемые популяции и методы

Заявление об этике

Все участники проходили лечение в соответствии с Хельсинкской декларацией об участии людей в медицинских исследованиях.От каждого субъекта было получено письменное информированное согласие, и исследование было одобрено Комитетом по этике Шанхайской легочной больницы.

Исследуемая популяция

Всего в исследование было включено 413 человек. Субъекты были разделены на четыре группы, включая группу ATB, группу нетуберкулезных заболеваний легких (NTBPD), группу медицинского персонала и группу здорового контроля. И группа ATB, и группа NTBPD были случайным образом выбраны из стационарных пациентов, посещавших Шанхайскую легочную больницу в период с января 2005 г. по декабрь 2008 г., включая 202 пациента с ATB [163 случая легочного ТБ (ЛТБ) плюс 39 случаев внелегочного ТБ (ВЛТБ)]. и 106 случаев пациентов с NTBPD соответственно.Кроме того, в этом исследовании приняли участие 20 медицинских работников туберкулезного отделения Шанхайской легочной больницы и 85 здоровых добровольцев. Тестирование на антитела к ВИЧ показало, что все субъекты были отрицательными. Среди группы АТБ у 30 больных выявлено сочетание с сахарным диабетом (СД). Однако в этом исследовании не было субъектов, выбывших из исследования. Общие характеристики, включенные в это исследование, показаны в Таблице 1 .

Таблица 1 Общая характеристика участников данного исследования
Полная таблица

Определенный диагноз ATB, PTB и EPTB был поставлен в соответствии с критериями Китайской противотуберкулезной ассоциации, в основном на основании признаков и симптомов, рентгенографии, компьютерной томографии (КТ) и выявления MTB в клиническом образце (мокрота или биопсия тканей).Подробно, определенный диагноз АТБ был поставлен следующим образом: (I) «АТБ, подтвержденный культурой/биопсией» основывался на положительной культуре или мазке МБТ из мокроты или образца биопсии; (II) отсутствие бактериальных/патологических признаков «клинического АТБ» было основано на клинических проявлениях или рентгенологических ответах на противотуберкулезное лечение. НТБЛД — это пациенты, у которых в анамнезе не было туберкулеза, в том числе пневмонии, бронхита, карциномы легких и других заболеваний легких. Диагностические критерии ПТБ с отрицательным результатом мазка следующие: (I) имел типичные клинические симптомы ПТБ и идентичные рентгенологические проявления грудной клетки; (II) получили положительный эффект от противотуберкулезного лечения; (III) исключены другие нетуберкулезные БП; (IV) представлен положительный тест сыворотки; (V) имел положительный результат ПЦР для обнаружения образца мокроты; (VI) патология легочной ткани подтверждена туберкулезом; (VII) обнаружили положительные микобактерии в жидкости бронхоальвеолярного лаважа; (VIII) при патологоанатомическом исследовании в бронхиальной и легочной ткани подтверждено туберкулезоподобное поражение.Утверждалось, если в прежних шести пунктах или в одном из 7-го и 8-го пунктов было три пункта. Диагноз НТБЛД был поставлен на основании бактериологического, клинического манифеста и других анализов. NTBPD и DM были независимо диагностированы профессиональными клиницистами на основании соответствующих медицинских данных. Кроме того, сотрудники лаборатории не знали клинического диагноза испытуемых, когда проводили тесты в настоящем исследовании.

Т-ОБРАЗНОЕ.ТБ анализ

Анализ

T-SPOT.TB выполняли в соответствии с инструкциями набора для анализа (Oxford Immunote Ltd., Эдинбург, Великобритания). Процедура описана следующим образом. Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) отделяют от образца цельной крови и промывают для удаления любых источников фонового мешающего сигнала. Для каждого образца требуется четыре лунки, включая нулевой контроль, панель А (ESAT-6), панель В (CFP10) и положительный контроль, содержащий фитогемагглютинин. PBMC инкубируют с антигенами, и секретируемый цитокин сенсибилизированными Т-клетками захватывается специфическими антителами на мембране, а затем клетки и другие нежелательные материалы удаляются промыванием.Наконец, цитокин был обнаружен с помощью анализа хромогенных пятен. Оценка результата тестирования интерпретируется путем подсчета точек в соответствии со следующим алгоритмом: (I) результат теста является «положительным», если (панель А минус нулевой контроль) и/или (панель В минус нулевой контроль) ≥6 точек; и (II) результат теста «Отрицательный», если и (панель A минус нулевой контроль), и (панель B минус нулевой контроль) ≤5 точек. Сюда входят значения меньше нуля.

Статистический анализ

Разница в категориальных переменных была оценена с использованием критерия хи-квадрат.Статистический анализ проводили с помощью SPSS 13.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США). Значение P менее 0,05 считалось значимым.


Результаты

Риск заражения ТБ среди ЛТБ, НТБД, медицинского персонала и здоровых людей

По результатам тестирования T-SPOT.TB положительные показатели у АТБ, НТБПД, медперсонала и здорового контроля составили 85,64%, 33,96%, 30.00% и 8,24% соответственно. Положительная частота T-SPOT у NTBPD и медицинского персонала была значительно выше, чем у здоровых людей (, таблица 2, ).

Таблица 2 Результаты тестирования T-SPOT.TB в разных подгруппах
Полная таблица

Производительность T-SPOT.ТБ для диагностики АТБ

По сравнению со здоровым контролем, чувствительность, специфичность, отношение правдоподобия положительное (+LR), отношение правдоподобия отрицательное (–LR) и диагностическое отношение шансов (DOR) T-SPOT.ТБ для диагностики АТБ составили 85,64%, 91,76%, 10,40%, 0,16% и 66,47% соответственно ( Таблица 3 ). Было показано, что эти результаты более эффективны при диагностике ATB в здоровой популяции, но не идеальны.

Таблица 3 Эффективность T-SPOT.TB для диагностики активного туберкулеза по сравнению со здоровым контролем
Полная таблица

По сравнению с NTBPD, чувствительность, специфичность, +LR и –LR и DOR T-SPOT.ТБ для диагностики АТБ составили 85,64%, 66,04%, 2,52%, 0,22% и 11,6% соответственно (, таблица 4, ). Специфичность, +LR и DOR были значительно ниже, чем в таблице 3 (P<0,05), что указывает на то, что T-SPOT.TB имел более низкую эффективность в диагностике ATB в популяции NTBPD.

Таблица 4 Эффективность T-SPOT.TB для диагностики активного туберкулеза в сравнении с нетуберкулезными заболеваниями легких
Полная таблица

Подгруппы анализов чувствительности T-SPOT.Туберкулез в диагностике ATB

Было показано, что как группа APTB, так и группа EPTB обладают высокой чувствительностью. Не было обнаружено существенной разницы в чувствительности T-SPOT.TB между двумя группами ( Таблица 5 ). Анализ подгрупп показал, что чувствительность T-SPOT.TB при диагностике АТБ не зависела от диабета ( Таблица 6 ). Согласно результатам тестирования, стратифицированным с помощью микроскопии мазка мокроты, чувствительность в группе с положительным мазком мокроты была значительно выше, чем в группе с отрицательным мазком ( Таблица 7 ).

Таблица 5 Сравнение чувствительности T-SPOT.TB между активным ЛТБ и внелегочным ТБ
Полная таблица Таблица 6 Сравнение чувствительности T-SPOT.TB при диагностике активного ТБ с диабетом или без него
Полная таблица Таблица 7 Результаты тестирования T-SPOT.TB на АТБ, стратифицированные с помощью микроскопии мазка мокроты
Полная таблица

Обсуждение

В качестве многообещающего подхода к диагностике АТБ и латентной туберкулезной инфекции (ЛТИ) его вдохновляет клиническое применение анализов высвобождения гамма-интерферона (IGRA), включая QuantiFERON TB Gold (QFT-G; Cellestis, Ltd., Карнеги, Австралия) и T-SOPT.TB. Тем не менее, для T-SOPT.TB все еще необходимо собрать клинические данные в различных условиях и популяциях, чтобы подтвердить его потенциальные значения и ограничения. В этом исследовании мы исследовали инфекцию ТБ среди населения, включая ATB, NTBPD, медицинский персонал и здоровую контрольную группу, с помощью анализа T-SOPT.TB.

По результатам T-SPOT.TB положительные показатели у НТБД, медперсонала и здорового контроля составили 33,96%, 30,00% и 8,24% соответственно.Это свидетельствует о том, что здоровые контроли в Южном Китае могут иметь высокую заболеваемость ЛТБИ. Удивительно, но более чем у 30% пациентов с подозрением на ЛТИ были обнаружены в НТБД и медперсонале. Мы постулируем, что возрастающий фактор воздействия в медицинских учреждениях может играть важную роль в этом исходе, что говорит о том, что необходимо срочно и важно улучшить меры личной безопасности в больничных условиях с высокой распространенностью.

По сравнению с популяцией с низким риском инфицирования ТБ (здоровая контрольная группа), чувствительность, специфичность, +LR, –LR и DOR T-SPOT.ТБ для диагностики АТБ составили 85,64%, 91,76%, 10,40%, 0,16% и 66,47% соответственно. Это предполагает, что T-SPOT.TB имел более высокую эффективность в диагностике ATB в популяции с более низким риском заражения туберкулезом. Напротив, предыдущие исследования в условиях низкой распространенности показали, что T-SPOT.TB имеет очень высокую специфичность (90-100%) (11,13,15).

Однако по сравнению с населением с высоким риском инфицирования ТБ (контроль NTBPD) чувствительность, специфичность, +LR, –LR и DOR T-SPOT.ТБ для диагностики АТБ составили 85,64%, 66,04%, 2,52%, 0,22% и 11,6% соответственно. Специфичность, +LR и DOR были ниже, что указывает на более низкую эффективность T-SPOT.TB (особенно в отношении специфичности) при диагностике ATB в популяции с высоким риском заражения туберкулезом. Поэтому мы полагали, что эффективность T-SPOT.TB для диагностики АТБ в популяции с высоким риском заражения ТБ не так хороша, как в популяции с низким риском заражения ТБ, и что высокая заболеваемость ЛТИ мешает в диагностике АТБ.Таким образом, необходимо соблюдать осторожность при интерпретации результатов тестирования T-SPOT.TB для диагностики ATB в группах высокого риска заражения туберкулезом, таких как пациенты с болезнью Паркинсона, медицинский персонал или близкие контакты. При этом условии значение исключения кажется лучше, чем значение правила.

Согласно метаанализу, проведенному в 2011 г. (16), специфичность IGRA для диагностики ЛТИ варьировала в пределах 98–100%. Положительный результат IGRAs был явно связан с воздействием заразных случаев ТБ.В заключение можно сказать, что IGRA может иметь относительное преимущество перед ТКП в выявлении ЛТБИ и позволяет исключить туберкулезную инфекцию с большей надежностью. Другой метаанализ, включавший объединенную выборку из 26 680 участников, показал, что IGRA не обладают высокой точностью для прогнозирования ATB, хотя использование IGRA в некоторых группах населения может уменьшить число людей, рассматриваемых для профилактического лечения (17). Однако из-за того, что в этом метаанализе не проводился анализ подгрупп конкретных групп населения, что отличается от наших результатов.Наше исследование показало, что IGRA может иметь диагностическую ценность для исключения в популяции с высоким риском заражения туберкулезом; однако наше исследование также продемонстрировало, что IGRA для диагностики ATB в популяции с низким риском инфицирования туберкулезом имеет высокую точность и DOR. Однако, согласно обновленному метаанализу диагностической точности IGRA при ТБ (18), общая чувствительность, специфичность, +LR, –LR и DOR IGRA составляли 0,85 (95% ДИ: 0,84–0,86), 0,84. (95% ДИ: 0,83-0,85), 7,82 (95% ДИ: 6,01-10.19), 0,17 (95% ДИ: 0,14–0,21) и 59,27 (95% ДИ: 40,19–87,42) соответственно. Для десяти исследований, оценивающих T-SPOT TB в Китае, комбинированная чувствительность, специфичность, +LR, –LR и DOR составляли 0,88 (95% ДИ: 0,86-0,91), 0,89 (95% ДИ: 0,86-0,92), 8,86 (95 % ДИ: 5,42–14,46), 0,13 (95% ДИ: 0,10–0,17) и 88,15 (95% ДИ: 41,76–186,07) соответственно. По сравнению с этим мета-анализом, специфичность, +LR и DOR IGRA для выявления ATB в популяции с высоким риском заражения туберкулезом в этом исследовании значительно ниже.Однако различий в чувствительности между двумя исследованиями не было.

В этом исследовании мы также провели подгрупповые анализы чувствительности T-SPOT.TB для диагностики АТБ в соответствии с ПТБ и ВЛТБ, с/без СД, положительным и отрицательным мазком мокроты. Мы обнаружили, что как активная группа PTB, так и группа EPTB обладают более высокой чувствительностью. Не было обнаружено существенной разницы в чувствительности между двумя группами. Учитывая, что диагностика ВЛТБ в настоящее время очень сложна, ценно, что экономящий время анализ достигает такой высокой чувствительности.В данном исследовании было 30 случаев АТБ больных СД. Чтобы выяснить, влияет ли изменение иммунного статуса, вызванное СД, на чувствительность T-SPOT.TB, мы провели анализ подгрупп для группы СД и группы НСД. Результаты показали, что чувствительность T-SPOT.TB для диагностики АТБ не зависела от диабета, что свидетельствует о том, что T-SPOT.TB также пригоден для скрининга АТБ при СД.

Мы обнаружили, что чувствительность T-SPOT.TB для диагностики ATB в группе с положительным мазком мокроты была значительно выше, чем в группе с отрицательным мазком.Мы предполагаем, что количество бацилл туберкулеза, вероятно, влияет на T-SPOT.TB. Предыдущее исследование показало, что RD1-специфические Т-клетки, продуцирующие IFN-гамма, по данным анализа T-SPOT.TB, могут быть напрямую связаны с бактериальной нагрузкой у пациентов, проходящих лечение от ЛТБ (19). Исследование, в котором приняли участие 491 ребенок с отрицательным мазком из двух больниц в Кейптауне, Южная Африка, показало, что в условиях высокого бремени T-SPOT.TB не имеет дополнительной ценности, кроме клинических данных и обычных тестов для диагностики туберкулеза в дети с отрицательным мазком (20).Однако для подтверждения требуется дополнительное исследование.

Следует отметить, что это исследование имело некоторые ограничения. Число выборок EPTB, DM и медицинского персонала невелико, что может привести к низкой достоверности доказательств. Кроме того, из-за отсутствия «золотого стандарта» диагностики ЛТБИ (21,22) мы не смогли оценить полную эффективность T-SPOT.TB для диагностики ЛТБИ.

По данным T-SPOT.TB, в Южном Китае наблюдается высокая заболеваемость ЛТИ среди населения в целом, особенно среди НТБЛ и медицинского персонала.T-SPOT.TB имел более высокую эффективность при диагностике АТБ в популяции с низким риском заражения ТБ, но T-SPOT.TB для диагностики АТБ в популяциях с высоким риском заражения ТБ, включая тесные контакты, такие как пациенты с PD или медицинским персоналом ненадежны из-за вмешательства LTBI. T-SPOT.TB подходит для экранирования ПТБ, ЭПТБ и АТБ в сочетании с ДМ. Однако чувствительность T-SPOT.TB в популяции с отрицательным мазком мокроты не так высока, как в популяции с положительным мазком.Поэтому мы считаем, что результаты тестирования T-SPOT.TB следует интерпретировать с осторожностью в сочетании с характеристиками субъекта в условиях высокой распространенности.


Выводы

Анализ T-SPOT.TB для диагностики ТБ имеет некоторые ограничения в условиях высокой распространенности, и его клиническую значимость следует интерпретировать с осторожностью в сочетании с характеристиками субъекта.


Благодарности

Эта работа была поддержана Национальной программой фундаментальных исследований Китая (973 Program, no.2012CB518706), Национального фонда естественных наук Китая (№ 81201253), Научно-технического бюро муниципалитета Чанчжоу (№ CJ2012202), Проекта профилактической медицины провинциального бюро общественного здравоохранения Цзянсу (№ Y2012095) и Шанхайского Муниципальное бюро здравоохранения (№ 20124200).

Раскрытие информации: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.


Ссылки

  1. Всемирная организация здравоохранения.Профили стран. Доклад о глобальной борьбе с туберкулезом, 2012 г.
  2. Рамос Дж. М., Робледано С., Масиа М. и др. Вклад тестов на высвобождение гамма-интерферона в диагностику латентной туберкулезной инфекции у ВИЧ-инфицированных пациентов: сравнение QuantiFERON-TB Gold In Tube, T-SPOT.TB и туберкулинового кожного теста. BMC Infect Dis 2012; 12:169. [ПубМед]
  3. Чжоу Л., Шен С., Хе М. и др. T-SPOT.TB в диагностике туберкулезного перитонита. Чжун Нан Да Сюэ Сюэ Бао И Сюэ Бан 2013; 38: 526-31.[ПубМед]
  4. Ли Ю.М., Парк К.Х., Ким С.М. и др. Факторы риска ложноотрицательных результатов T-SPOT.TB и туберкулиновой кожной пробы при внелегочном туберкулезе. Инфекция 2013;41:1089-95. [ПубМед]
  5. Лалвани А., Нагвенкар П., Удвадиа З. и др. Подсчет Т-клеток, специфичных к антигенам, кодируемым RD1, предполагает высокую распространенность латентной инфекции Mycobacterium tuberculosis у здоровых городских индийцев. J Infect Dis 2001;183:469-77. [ПубМед]
  6. Патан А.А., Уилкинсон К.А., Кленерман П. и соавт.Прямой ex vivo анализ антиген-специфических IFN-gamma-секретирующих CD4 T-клеток у лиц, инфицированных Mycobacterium tuberculosis: связь с клиническим состоянием заболевания и эффектом лечения. Дж. Иммунол 2001; 167:5217-25. [ПубМед]
  7. Лалвани А., Патан А.А., Дуркан Х. и др. Расширенное отслеживание контактов и пространственное отслеживание инфекции Mycobacterium tuberculosis путем подсчета антиген-специфических Т-клеток. Ланцет 2001;357:2017-21. [ПубМед]
  8. Лалвани А., Патан А.А., МакШейн Х. и др.Быстрое выявление инфекции Mycobacterium tuberculosis путем подсчета антигенспецифических Т-клеток. Am J Respir Crit Care Med 2001;163:824-8. [ПубМед]
  9. Чжао Дж., Ван И, Ван Х и др. Низкая согласованность между тестом T-SPOT®.TB и кожным туберкулиновым тестом среди студентов колледжей в Китае. Int J Tuberc Lung Dis 2011;15:134-6. [ПубМед]
  10. Султан Б., Бенн П., Махунгу Т. и др. Сравнение двух анализов высвобождения гамма-интерферона (QuantiFERON-TB Gold In-Tube и T-SPOT.ТБ) при тестировании на латентную туберкулезную инфекцию среди ВИЧ-инфицированных взрослых. Int J STD AIDS 2013;24:775-9. [ПубМед]
  11. Talbot EA, Harland D, Wieland-Alter W, et al. Специфичность туберкулиновой кожной пробы и теста T-SPOT.TB у учащихся в условиях низкой заболеваемости туберкулезом. J Am Coll Health 2012; 60:94-6. [ПубМед]
  12. Бинек Д.Р., Чанг К.К. Оценка высвобождения гамма-интерферона, T-SPOT.TB, в популяции с низкой распространенностью туберкулеза. Int J Tuberc Lung Dis 2009;13:1416-21.[ПубМед]
  13. Барсегян В., Матиас К.Д., Райтон-Смит П. и др. Распространенность латентной туберкулезной инфекции у немецких рентгенологов. J Hosp Infect 2008; 69: 69-76. [ПубМед]
  14. Cheallaigh CN, Fitzgerald I, Grace J, et al. Анализы высвобождения гамма-интерферона для диагностики латентной инфекции ТБ у ВИЧ-инфицированных в стране с низким бременем ТБ. PLoS One 2013;8:e53330. [ПубМед]
  15. Адамс Л.В., Уодделл Р.Д., Фон Рейн CF. Результаты теста T-SPOT.TB Test(R) у взрослых с легочным заболеванием комплекса Mycobacterium avium.Scand J Infect Dis 2008;40:196-203. [ПубМед]
  16. Диэль Р., Голетти Д., Феррара Г. и др. Анализы высвобождения интерферона-γ для диагностики латентной инфекции Mycobacterium tuberculosis: систематический обзор и метаанализ. Европейское дыхание J 2011; 37:88-99. [ПубМед]
  17. Rangaka MX, Wilkinson KA, Glynn JR, et al. Прогностическое значение анализа высвобождения интерферона-γ при заболевании активным туберкулезом: систематический обзор и метаанализ. Ланцет Infect Dis 2012;12:45-55. [ПубМед]
  18. Дай Ю., Фэн Ю., Сюй Р. и др.Оценка высвобождения гамма-интерферона для диагностики туберкулеза: обновленный метаанализ. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2012;31:3127-37. [ПубМед]
  19. Рибейро С., Дули К., Хэкман Дж. и др. Ответы T-SPOT.TB при лечении туберкулеза легких. BMC Infect Dis 2009; 9:23. [ПубМед]
  20. Линг Д.И., Никол М.П., ​​Пай М. и др. Приращение значения T-SPOT.TB для диагностики активного туберкулеза легких у детей в условиях высокой нагрузки: многопараметрический анализ.Торакс 2013;68:860-6. [ПубМед]
  21. Лагранж П.Х., Симонни Н., Херрманн Дж.Л. Новые иммунологические тесты в диагностике туберкулеза. Преподобный Мал Респир 2007; 24:453-72. [ПубМед]
  22. Мочко Ю., Сломко З., Бреборович Г. Математические основы биофизических методов мониторинга плода. II. Кардиотокография. Гинекол Пол 1989;60:343-9. [ПубМед]

Цитируйте эту статью как: Zhu C, Liu Z, Li Z, Mei S, Hu Z. Производительность и ограничения T-SPOT.ТБ для диагностики ТБ в условиях высокой распространенности. J Thorac Dis 2014;6(6):713-719. doi: 10.3978/j.issn.2072-1439.2014.04.38

Анализ факторов, влияющих на точность диагностики активного туберкулеза с помощью T-SPOT.TB в клинической практике Национальный третичный медицинский центр в Китае. В частности, мы проанализировали факторы риска, связанные с диагностической точностью T-SPOT.ТБ. PUMCH является одним из национальных специализированных центров для лечения сложных и редких заболеваний. Большинство пациентов побывали во многих больницах для диагностики и лечения, прежде чем попасть в наше отделение. В PUMCH почти у четверти пациентов с лихорадкой неизвестного происхождения (FUO) в конечном итоге был диагностирован ATB

12, 13 . Только у одной трети пациентов с ATB, представленным как FUO, был микробиологически диагностирован 14 . В этой ситуации важна проверка простых и быстрых тестов, таких как T-SPOT.TB.

В этом исследовании серозный выпот был идентифицирован как независимый фактор риска, связанный с чувствительностью T-SPOT.TB. Возраст, ТБ в анамнезе или рентгенологические признаки, указывающие на предыдущий ТБ, применение иммунодепрессантов или глюкокортикоидов и количество лимфоцитов были независимыми факторами риска, связанными со специфичностью теста T-SPOT.TB. Исследования факторов, влияющих на чувствительность IGRA, ограничены. Исследование во Вьетнаме проанализировало ложноотрицательные результаты QFT-GIT у 19 больных туберкулезом с положительным мазком/подтвержденным посевом 15 и продемонстрировало, что у большинства пациентов с ATB, показавших отрицательные результаты IGRA, не удалось восстановить достаточный уровень иммунного ответа, несмотря на успешное лечение.Авторы пришли к выводу, что недостаточный уровень иммунного ответа может повлиять на чувствительность IGRA. Другое исследование 172 пациентов с подтвержденным туберкулезом в Танзании показало, что курение сигарет было связано с ложноотрицательными результатами QFT-GIT с помощью логистического регрессионного анализа, скорректированного с учетом пола, возраста, ВИЧ и потребления алкоголя (ОШ 17,1, 95% ДИ: 3,0–99,1, p < 0,01) 16 . Кроме того, сообщалось, что низкое количество периферических лимфоцитов и количество CD4 в сочетании с высоким/нормальным количеством CD8 были связаны с ложноотрицательными результатами IGRA у пациентов с микробиологически подтвержденным ATB 17, 18 .Также сообщалось, что старение, истощение, коинфекция ВИЧ и генотип HLA показали значительную связь с отрицательным результатом IGRA у пациентов с легочным туберкулезом с подтвержденным посевом 19 .

Наше предыдущее исследование 20 , в котором выявляли T-SPOT.TB у больных туберкулезным серозитом, показало, что чувствительность T-SPOT.TB на серозную жидкость и РВМС составила 91,9% и 73,0% соответственно. Концентрация INF-γ-секретирующих Т-клеток в серозной жидкости была в пять раз выше, чем в крови. Исследования в Тайване 21 и Европе 22 показали стабильные результаты.Исследование с применением QFT-G в диагностике туберкулезного серозита также показало аналогичные результаты 23 . Возможной причиной должна быть миграция антиген-специфических Т-клеток МТБ из периферической крови в серозную полость с экспрессией молекулы межклеточной адгезии, что приводит к снижению чувствительности T-SPOT.TB на РВМС 24 .

IGRA основан на клеточном иммунном ответе, индуцированном MTB-специфическими антигенами. Теоретически возможно получение положительных результатов IGRA при заражении МБТ, включая АТБ, ЛТБИ и туберкулезный анамнез.При диагностике АТБ IGRA могут давать «ложноположительные» результаты у пациентов с ЛТБИ и ТБ в анамнезе. Исследование, проведенное в Китае, показало, что клинические факторы, в том числе возраст (≥46 лет) и ТБ в анамнезе, являются независимыми факторами риска ложноположительных результатов T-SPOT.TB 25 , что аналогично нашим выводам. В нашем исследовании ТБ в анамнезе/радиологические признаки, указывающие на предыдущий ТБ, были независимым фактором риска специфичности, что указывает на то, что специфическая Т-клеточная реакция может все еще существовать после выздоровления ATB.Кроме того, возраст и применение иммунодепрессантов/глюкокортикоидов также значительно повлияли на специфичность T-SPOT.TB. Более высокие положительные результаты T-SPOT.TB, вероятно, отражали более высокую долю ЛТБИ у пациентов с этими двумя косвенными факторами 26 . Интересно, что мы обнаружили, что количество лимфоцитов также может влиять на специфичность T-SPOT.TB при диагностике АТБ, и результаты с большей вероятностью будут положительными, когда количество лимфоцитов превысит 1500 клеток/мм3.Исследование, проведенное в Японии, показало, что чувствительность теста T-SPOT.TB значительно снижалась с уменьшением количества периферических лимфоцитов у пациентов с микробиологически подтвержденным активным легочным ТБ, и у пациентов с большей вероятностью были отрицательные результаты теста T-SPOT.TB, когда количество лимфоцитов снижалось. менее 500 клеток/мм 3  17 .

В то время как низкая специфичность и положительный PV снижали полезность T-SPOT.TB для диагностики АТБ в регионах с высокой эпидемией, это исследование показало, что NPV был высоким (91.2%), что указывало на то, что отрицательный результат может быть полезен для исключения АТБ. В регионах с высокой эпидемией ТБ является частой причиной ЛНЯ, и его часто необходимо включать в дифференциальную диагностику. Исследования показали, что у 21,8-24,8% пациентов, госпитализированных в третичные больницы общего профиля из-за лимфатической лимфаденэктомии, окончательно диагностируется АТБ в год со средним временем диагностики 19 недель 90-188 12, 13 90-189 . Основываясь на этом исследовании, отрицательный T-SPOT.TB обеспечил эффективный способ исключения ATB у некоторых пациентов, предотвращения ненужного применения противотуберкулезных препаратов и их побочных эффектов 27 .

В этом исследовании чувствительность T-SPOT.TB для диагностики ТБ составила 78,5%, в то время как чувствительность T-SPOT.TB для диагностики подтвержденного ТБ составила 94,8%, а чувствительность T-SPOT.TB для диагностики клинически диагностированного ТБ составил 72,1%. Этот вывод был аналогичен результату (78,2%) другого исследования Qiu, Y et al . проводится в трех специализированных противотуберкулезных больницах Китая 28 . Наш результат был немного ниже результата (85%) Wang, L et al . проводится в больнице общего профиля на западе Китая 29 .В нашем исследовании специфичность T-SPOT.TB для диагностики туберкулеза составила 74,1%, что ниже результатов Qiu, Y (91,1%) и Wang, L (85,1%). Многоцентровое эпидемиологическое исследование латентной туберкулезной инфекции (ЛТБИ) показало, что уровень положительных результатов IGRA (QFT-GIT) составлял 18,9% в сельских районах Китая 30 , что означает, что почти 20% населения Китая в целом имели ЛТБИ. T-SPOT.TB был положительным у 25,9% пациентов с нетуберкулезом в нашем исследовании, что выше национальных эпидемиологических данных.Мы предполагаем, что это произошло потому, что все испытуемые были стационарными пациентами, которые, возможно, имели более высокий риск ЛТИ, а группа без туберкулеза включала инфекции, вызванные другими патогенами, ревматические и иммунные заболевания, злокачественные опухоли и т. д., и 15,8% эти пациенты принимали глюкокортикоиды/иммунодепрессанты, у 13,2% этих пациентов был предыдущий ТБ/радиологические признаки старого ТБ. Все это приведет к положительному результату T-SPOT.TB.

При стратификации пациентов по факторам, влияющим на диагностическую эффективность T-SPTO.TB, T-SPOT.TB показал наибольшую диагностическую ценность у пациентов без предшествующего анамнеза ТБ, без использования иммунодепрессантов/глюкокортикоидов, без серозного выпота и в возрасте до 30 лет, с PLR 9,96 и NLR 0,11. Таким образом, для пациентов с вышеуказанным состоянием T-SPOT.TB может быть более ценным для помощи в диагностике ATB и исключении ATB из клинической практики.

Поскольку все участники этого исследования были ВИЧ-отрицательными пациентами, результаты этого исследования не должны применяться к пациентам с ВИЧ/СПИДом.

Одним из ограничений этого исследования было то, что многие пациенты с ATB были клинически диагностированы без культурального подтверждения, что отражает реальную клиническую ситуацию. Это, вероятно, занижает или переоценивает точность T-SPOT.TB для диагностики ATB. Тем не менее, были предприняты все усилия для наблюдения за пациентами, у которых нет подтвержденного возбудителя туберкулеза, чтобы сделать диагноз как можно более точным. Во-вторых, поскольку исследовательский центр является национальным центром диагностики и лечения сложных заболеваний, ожидается, что спектр заболеваний будет отличаться от специфических противотуберкулезных больниц и периферийных медицинских центров.Может существовать систематическая ошибка отбора, которая предполагает предостережения при обобщении результатов.

В заключение, это исследование показало умеренную чувствительность и специфичность T-SPOT.TB для диагностики АТБ в стране с высоким бременем. Серозный выпот был независимым фактором риска для более низкой чувствительности, в то время как возраст (> 30 лет), история туберкулеза / рентгенологические признаки, указывающие на предыдущий туберкулез, применение иммунодепрессантов или глюкокортикоидов и количество лимфоцитов (> 1500 клеток / мм 3 ) были независимыми факторами риска для более низкой специфичности T-SPOT.тест на ТБ.

Границы | Гранулоциты низкой плотности влияют на анализ T-SPOT.TB путем ингибирования продукции интерферона-γ в Т-клетках через путь PD-L1/PD-1

Введение

Туберкулез является одной из 10 основных причин смерти во всем мире и ведущей причиной смерти от одного инфекционного агента. Как сообщается в Докладе о глобальном туберкулезе за 2019 г. (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2019 г.), примерно 1,7 миллиарда человек были инфицированы Mycobacterium tuberculosis ( Mtb ) в латентном состоянии инфекции, из которых 5–10% вероятный прогресс в активную форму туберкулеза в их жизни.Однако риск реактивации латентного туберкулеза заметно повышен среди лиц с ослабленным иммунитетом, таких как лица с аутоиммунными заболеваниями, раком, диабетом или ВИЧ-инфекцией (Balbi et al., 2018; Ho and Leung, 2018; Lee et al., 2018). ). Поэтому очень важно выявлять этих инфицированных лиц в популяциях с высоким риском активации туберкулеза. С другой стороны, из-за отсутствия чувствительных и специфических методов диагностики диагностика туберкулеза по-прежнему сталкивается с большими трудностями, особенно у пациентов с отрицательными бактериологическими показателями (Singhania et al., 2018).

Анализ

T-SPOT.TB (T-SPOT) является наиболее часто используемым методом скрининга или исключения инфекции Mtb во всем мире (Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ], 2018; Haas and Belknap, 2019), который был включены в руководства по диагностике и лечению туберкулеза более чем в 20 странах мира. Первым и ключевым этапом анализа T-SPOT является выделение мононуклеарных клеток из периферической крови с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла с последующим культивированием и стимуляцией этих мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) антигенами Mtb для индукции гамма-интерферона (ИФН). -γ) секреция в Mtb -специфических Т-клетках, которые были сенсибилизированы антигенами Mtb в организме инфицированного человека.Наконец, количество Т-клеток, секретирующих IFN-γ (ISC), определяли методом ELISPOT. Таким образом, для анализа T-SPOT получение высококачественных РВМС является предпосылкой для получения надежных результатов обнаружения.

Однако недавние исследования показали, что РВМС, полученные центрифугированием в градиенте плотности, часто смешиваются с популяцией нейтрофилов у больных туберкулезом и у некоторых других пациентов с высоким риском активации туберкулеза, таких как пациенты с аутоиммунными заболеваниями, раком или ВИЧ-инфекцией (Denny и другие., 2010; Клок и др., 2012; Сагив и др., 2015; Денг и др., 2016). Эти гранулоциты называются гранулоцитами низкой плотности (LDG) из-за их более низкой плотности, чем у гранулоцитов нормальной плотности (NDG).

В этом исследовании мы исследовали, влияют ли эти аномально повышенные ЛДГ в РВМС на анализ T-SPOT и связанный с ним механизм. Наши результаты показывают, что ЛДГ могут значительно снижать положительную скорость теста T-SPOT, и основной механизм связан с высокой экспрессией лиганда запрограммированной смерти 1 (PD-L1) на ЛДГ, что может подавлять активацию Т-клеток и продукция IFN-γ в Т-клетках.

Материалы и методы

Субъекты и образцы

В общей сложности 186 пациентов с туберкулезом легких были набраны из грудной больницы Цзянси с ноября 2018 г. по октябрь 2019 г. Диагностические критерии туберкулеза легких соответствовали «Руководству по клинической диагностике и лечению: туберкулезная секция Китая» (Китайская медицинская Ассоциация, 2005). Все пациенты в этом исследовании были подтверждены бактериологическим тестом, включая микроскопию мазка или культуру Mtb .За тот же период были набраны четырнадцать здоровых добровольцев, соответствующих возрасту и полу, с отрицательным результатом T-SPOT, без симптомов. Из исследования были исключены все пациенты с беременностью, аутоиммунными заболеваниями, раком, ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом, хронической почечной недостаточностью, хроническим заболеванием печени и текущей или недавней инфекцией.

Это исследование было одобрено Комитетом по этике (номер: 2018YYLS006) Первой дочерней больницы Наньчанского университета и проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией.Письменное информированное согласие было получено от всех субъектов, включенных в это исследование. Все эксперименты проводятся в лаборатории уровня биобезопасности 2.

Изоляция клеток

Фракции PBMC и NDG были выделены из образцов периферической крови с помощью центрифугирования в градиенте плотности, как описано ранее (Su et al., 2019). ЛДГ очищали от фракции РВМС методом иммуно-магнитно-негативной изоляции с использованием набора EasySep Direct Human Neytrophil Isolation Kit (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада) в соответствии с инструкциями производителя.LDG были идентифицированы как CD14 l ow CD15 + гранулоцитов с помощью проточной цитометрии (FCM).

Удаление ЛДГ из РВМС проводили с помощью иммуномагнитно-позитивной изоляции с использованием набора EasySep Human CD15 Positive Selection Kit (STEMCELL Technologies, Ванкувер, Канада) в соответствии с инструкциями производителя. Жизнеспособность клеток определяли окрашиванием трипановым синим, и в последующих экспериментах использовали образцы с более чем 95% жизнеспособных клеток.

Бактериальные штаммы и инфекции

Штамм

Mtb h47Rv культивировали при 37°C до начала средней логарифмической фазы в бульоне Миддлбрука 7H9, затем умерщвляли при 95°C в течение 30 мин. Чтобы получить суспензию одиночных клеток, бактериальные агрегаты обрабатывали ультразвуковым шейкером в течение 5 минут, оставляли стоять на 15 минут, затем собирали и доводили плотность до 0,5 при OD600 (приблизительно 10 7 бактерий/мл). Для инфекции in vitro цельную кровь инфицировали Mtb при множественности заражения (MOI) 5 (от бактерий до нейтрофилов), как описано ранее (Su et al., 2019).

Анализ проточной цитометрии

Клетки инкубировали с реагентом, блокирующим FcR, в течение 5 минут, после чего инкубировали со смесью флуоресцентно-меченых моноклональных антител против человека или без нее: CD14-ECD, CD15-PE-Cy5, CD3-флуоресцеинизотиоцианат (FITC) и IFN-γ- PE (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США) в течение 30 мин. Для внутриклеточного окрашивания клетки перед окрашиванием обрабатывали реагентом IntraPrep Permeabilization Reagent (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США).Аннексин V-FITC и йодид пропидия использовали для исключения мертвых клеток из анализа. Автофлуоресценцию и неспецифическое окрашивание определяли с использованием контролей, соответствующих изотипу. Анализ проводили с использованием проточного цитометра Cytomics FC 500 (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США).

Анализы T-SPOT.TB

Тест T-SPOT.TB (Oxford Immunotec Ltd., Абингдон, Великобритания) проводили в соответствии с инструкциями производителя. Периферическую венозную кровь собирали в вакуумные контейнеры, содержащие антикоагулянт гепарин, и обрабатывали в течение 4 ч после флеботомии.Фракции РВМС выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла, культивировали в лунках планшета для микротитрования, предварительно покрытых антителами против IFN-γ, в количестве 1,5 × 10 ± 5 клеток на лунку в присутствии ESAT-6 и CFP-10, или фитогемагглютинин (ФГА) в качестве положительного контроля или равный объем среды AIM-V в качестве отрицательного контроля. После инкубации в течение 18–20 ч добавляли вторичное антитело, конъюгированное со щелочной фосфатазой, и хромогенный субстрат для образования видимых пятен. Подсчет пятен проводили с помощью ридера vSPOT ELISPOT (Autoimmun Diagnostika GmbH, Германия).Результаты выражены в виде клеток, образующих пятна, или клеток, секретирующих IFN-γ (ISC). Результат считается положительным, когда количество точек в любой лунке для тестирования (лунки для стимуляции ESAT-6 и CFP-10) минус количество точек в лунке для отрицательного контроля составляет ≥6 или когда количество точек в любой лунке для тестирования составляет ≥2 раза больше количества пятен в лунке отрицательного контроля.

Статистический анализ

Значения были представлены как среднее ± SD или среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM) и проанализированы с использованием GraphPad Prism 5.ПО 01. Критерий Колмогорова-Смирнова использовался для проверки нормального распределения. Независимые выборки t -критерий и однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) использовались, когда было подтверждено нормальное распределение данных, а U-критерий Манна-Уитни использовался для переменных без нормального распределения. Критерий хи-квадрат использовался для сравнения частот между группами. Различия считали статистически значимыми при P < 0,05.

Результаты

Частота LDG коррелирует с результатами обнаружения T-SPOT у больных туберкулезом

По частоте ЛДГ в РВМС 61 больной туберкулезом был разделен на две группы: группу высокой частоты ЛДГ (ЛДГ > 3%, n = 39) и группу низкой частоты ЛДГ (ЛДГ ≤ 3%, n = 22), и сравнивали положительные показатели T-SPOT и количество ISC в этих двух группах.Результаты показали, что положительная частота анализа T-SPOT в группе с высокой частотой LDG была значительно ниже, чем в группе с низкой частотой LDG (таблица 1). Кроме того, количество ISC в ответ на стимуляцию ESAT-6 и CFP-10 было значительно ниже в группе с высокой частотой LDG, чем в группе с низкой частотой LDG (рис. 1).

Таблица 1. Результаты анализа T-SPOT у больных туберкулезом с высокой или низкой частотой гранулоцитов низкой плотности (ЛДГ).

Рисунок 1. Количество интерферон-γ-секретирующих клеток (ИСК) у больных туберкулезом с высокой частотой гранулоцитов низкой плотности (ЛДГ) (>3%) ниже, чем с низкой частотой ЛДГ (≤3%). Число ИСК в ответ на (А) ESAT-6 и (Б) CFP-10 у пациентов с высокой частотой ЛДГ ( n = 39) значительно ниже, чем у пациентов с низкой частотой ЛДГ ( n = 22). (C) Количество суммарных ИСК в ответ на ESAT-6 и CFP-10 у пациентов с высокой частотой ЛДГ значительно ниже, чем у пациентов с низкой частотой ЛДГ.Каждый символ обозначает одного субъекта, и показано среднее значение ± SD для каждой изучаемой популяции. Статистическую значимость определяли с помощью непарного теста Стьюдента t .

ЛДГ не секретируют IFN-γ в ответ на стимуляцию антигенов

Mtb

Учитывая высокую долю ЛДГ в РВМС больных туберкулезом и пациентов с высоким риском реактивации туберкулеза, первое, что мы хотим знать, это могут ли эти ЛДГ также секретировать IFN-γ при стимуляции Mtb антигены.

РВМС выделяли от больных туберкулезом и стимулировали ESAT-6 и CFP-10 соответственно с последующей инкубацией в течение 18–20 часов. Внутриклеточный IFN-γ LDG был обнаружен с помощью FCM. Результаты показали, что независимо от того, стимулировались они или нет, LDG не продуцировали IFN-γ (рис. 2A–C). Кроме того, очищенные LDG с чистотой выше 90% были обнаружены для секреции IFN-γ с использованием набора T-SPOT.TB в соответствии с инструкциями производителя, за исключением того, что PBMC были заменены очищенными LDG.Результаты подтвердили, что LDG не секретируют IFN-γ при стимуляции антигенами Mtb и PHA (рис. 2D).

Рисунок 2. Определение продукции гамма-интерферона (IFN-γ) в гранулоцитах низкой плотности (LDG). Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), выделенные от больных туберкулезом ( n = 5), стимулировали ESAT-6 или CFP-10 или без них в течение 18–20 часов. (A) LDG были включены в PBMC как популяции CD14 l ow CD15 + с помощью проточной цитометрии, а внутриклеточный IFN-γ LDG был обнаружен с помощью FCM. (B) Репрезентативные изображения обнаружения репрезентативного субъекта с помощью проточной цитометрии (FCM) и уровни внутриклеточного IFN-γ выражали как среднее значение ± SD . (C) Статистическую значимость определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). PBMC или очищенные LDG использовались для анализа T-SPOT, и (D) группа изображений результатов одного субъекта была показана в качестве репрезентативного результата от 1/12 пациентов.

Удаление ЛДГ из клеток РВМС с повышенной секрецией интерферона-γ и положительными результатами T-SPOT.Анализ на туберкулез

От больных ТБ было выделено

РВМС, а частоты ЛДГ были выявлены с помощью ФКМ. Образцы с высокой частотой LDG (LDG> 3%) были отобраны и разделены на две части, одна из которых была непосредственно обнаружена с помощью анализа T-SPOT. Количество мононуклеарных клеток, используемых для анализа T-SPOT, доводили до 1,5 × 10 5 на лунку в соответствии с частотами LDG. LDG в другой части PBMC были удалены. Затем проводили анализ T-SPOT с очищенными мононуклеарными клетками при 1.5 × 10 5 клеток/лунку. Результаты показали, что после удаления LDG количество ISC значительно увеличилось в ответ на стимуляцию как ESAT-6 ( P = 0,0049), так и CFP-10 ( P = 0,0055) (рис. 3). Суммарные ИСК в ответ на ESAT-6 и CFP-10 также были значительно увеличены в условиях удаления ЛДГ ( P = 0,0041). Кроме того, частота положительных результатов анализа T-SPOT увеличилась с 77,78 до 94,44% после удаления ЛДГ, но разница была незначительной ( P = 0.1482), поскольку количество отрицательных образцов было относительно небольшим.

Рисунок 3. Количество интерферон-γ-секретирующих Т-клеток (ISC) увеличилось после удаления гранулоцитов низкой плотности (LDG). (A) LDG в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC) больных туберкулезом ( n = 16) удаляли с помощью иммуномагнитной сепарации, и анализы T-SPOT проводили с необработанными PBMC и PBMC без LDG, соответственно, с таким же количеством мононуклеаров.ISCs в ответ на стимуляцию (B) ESAT-6 и (C) CFP-10 и (D) сумму ISCs в ответ на ESAT-6 и CFP-10 подсчитывали и сравнивали с помощью парный Стьюдента т -тест. (E) Положительные показатели анализа T-SPOT сравнивали с помощью критерия хи-квадрат.

Экзогенное добавление LDG снизило ISC и количество положительных результатов анализа T-SPOT.TB

Периферическую кровь больных туберкулезом с низкой частотой ЛДГ (ЛДГ ≤ 3%) инфицировали убитыми нагреванием Mtb при множественности инфекций 5 ( Mtb к нейтрофилам) в течение 2 ч, чтобы вызвать увеличение ЛДГ.Затем выделяли РВМС из инфицированной периферической крови и методом отрицательной магнитной сортировки выделяли ЛДГ в этой фракции РВМС. Очищенные ЛДГ с чистотой выше 90% добавляли в аутологичные РВМС до конечного процентного содержания 11–30%; затем эти PBMC с экзогенными LDG и другими необработанными аутологичными PBMC использовали для обнаружения T-SPOT с тем же количеством мононуклеарных клеток. Результаты показали, что по сравнению с необработанной группой экзогенное добавление LDG значительно снижает количество ISC как в ответ на ESAT-6 ( P = 0.0008) и CFP-10 ( P = 0,0027) (рис. 4). Суммарные ИСК в ответ на ESAT-6 и CFP-10 также значительно снижались при добавлении ЛДГ ( P = 0,0008). Положительный показатель анализа T-SPOT снизился со 100,00 до 59,09% после добавления LDG ( P = 0,0008).

Рисунок 4. Добавление экзогенных гранулоцитов низкой плотности (LDG) снижало количество секретирующих интерферон-γ Т-клеток (ISC) в анализе T-SPOT. Очищенные ЛДГ добавляли в аутологичные мононуклеарные клетки периферической крови (МПК) больных туберкулезом с низкой частотой ЛДГ ( n = 18) до конечного процента 11–30%.Анализы T-SPOT проводили с необработанными PBMC и PBMC с добавлением LDG, соответственно, с одинаковым количеством мононуклеарных клеток. ISC в ответ на стимуляцию (A) ESAT-6 и (B) CFP-10 и (C) сумму ISC в ответ на ESAT-6 и CFP-10 подсчитывали и сравнивали попарно. Студенческая т -тест. (D) Положительные показатели анализа T-SPOT сравнивали с помощью критерия хи-квадрат.

Частоты LDG коррелируют с продукцией IFN-γ в Т-клетках

Было доказано, что Т-клетка

является основным источником ИСК.Чтобы дополнительно выяснить, достигается ли эффект ЛДГ путем нацеливания на Т-клетки, продукция IFN-γ в Т-клетках была обнаружена с помощью FCM у больных туберкулезом. Результаты показали, что частота Т-клеток, продуцирующих IFN-γ, была значительно ниже у пациентов с высокой частотой LDG, чем у пациентов с низкой частотой LDG, как в ответ на ESAT-6 ( P = 0,0088), так и на стимуляцию CFP-10 (). Р = 0,0082). Корреляционный анализ показал, что в ответ на стимуляцию ESAT-6 частоты Т-клеток, продуцирующих IFN-γ, отрицательно коррелировали с частотами LDG (рис. 5).

Рисунок 5. Частота встречаемости гранулоцитов низкой плотности (ЛДГ) коррелирует с продукцией интерферона-гамма (ИФН-γ) в Т-клетках. (A) Репрезентативные графики рассеяния проточной цитометрии продукции IFN-γ в Т-клетках. Продукция ИФН-γ Т-клетками в ответ на (Б) ESAT-6 и (В) CFP-10 у пациентов с высокими частотами ЛДГ ( n = 14) значительно ниже, чем у пациентов с низкими частотами ЛДГ. ( n = 15).Ро-корреляции Спирмена между частотой ЛДГ и продукцией IFN-γ в Т-клетках. (D) ESAT-6 (rho = -0,43; P = 0,0207). (E) CFP-10 (rho = -0,36; P = 0,0501).

ЛДГ больных туберкулезом экспрессируют высокий уровень PD-L1

Вышеупомянутые результаты демонстрируют, что LDG могут оказывать супрессивное действие на Т-клеточный ответ на антигены Mtb и снижать продукцию IFN-γ. Транскриптомный анализ в одном из предыдущих исследований показал, что ЛДГ могут секретировать ИЛ-10 (La Manna et al., 2019), один из известных иммуносупрессивных цитокинов. Чтобы выяснить, могут ли LDG подавлять продукцию IFN-γ Т-клетками путем секреции IL-10, мы обнаружили уровни IL-10 в культуральном супернатанте PBMC с низким (<3%) или высоким (>10%) процентным содержанием LDG. Результаты показали, что не было существенной разницы в уровнях IL-10 в супернатанте PBMC с различным соотношением LDG в ответ на стимуляцию как ESAT-6, так и CFP-10 (рис. 6).

Рис. 6. Секреция интерлейкина (IL)-10 и уровни экспрессии иммуносупрессивных костимулирующих молекул в гранулоцитах нормальной плотности (NDG) здоровых людей и гранулоцитах низкой плотности (LDG) больных туберкулезом. (A,B) Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) больных туберкулезом с низким (<3%, n = 10) или высоким (>10%, n = 10) процентом ЛДГ культивировали в течение 24 ч при стимуляции антигенами Mtb , и определяли уровни IL-10 в культуральном супернатанте. (C–F) Частота запрограммированной смерти 1 (PD-1)-, лиганда запрограммированной смерти 1 (PD-L1)-, ингибитора иммунорецептора на основе тирозина (TIGIT)-, а также Т-клеточного иммуноглобулина и муцинового домена- содержащие белок 3 (TIM-3)-экспрессирующие LDG у больных туберкулезом ( n = 14), и частоты PD-1-, PD-L1-, TIGIT- и TIM-3-экспрессирующих NDG у здоровых контролей ( n = 14) определяли и сравнивали. Данные выражали как среднее значение ± SD , а статистическую значимость определяли с помощью (A, B) непарного критерия Стьюдента t или (C–F) парного критерия Стьюдента t .

Иммуносупрессивные костимулирующие молекулы, такие как запрограммированная смерть 1 (PD-1), лиганд запрограммированной смерти 1 (PD-L1), белок 3, содержащий Т-клеточный иммуноглобулин и домен муцина (TIM-3), и иммунорецепторные ингибиторы на основе тирозина. Сообщалось, что домены (TIGIT) играют важную роль в модулировании функции Т-клеток (Singh et al., 2013, 2014; Wang et al., 2015; Jayaraman et al., 2016). Поэтому мы сравнили уровни экспрессии PD-1, PD-L1, TIM-3 и TIGIT на NDG и LDG.Данные показали, что частота PD-L1-позитивных клеток в LDG была значительно выше, чем в NDG (рис. 6, P = 0,0072). Не наблюдалось существенной разницы в частоте клеток, экспрессирующих PD-1, клеток, экспрессирующих TIM3, и клеток, экспрессирующих TIGIT, между LDG и NDG (рис. 6).

Блокировка сигнала PD-L1 значительно увеличивает количество ISC

Сообщалось, что путь

PD-1/PD-L1 играет важную роль в ослаблении иммунного ответа. Наблюдение, что LDG экспрессируют более высокий уровень PD-L1, намекнуло нам, что LDG могут влиять на анализ T-SPOT через путь PD-1-PD-L1.Для проверки этой гипотезы РВМС были выделены от больных туберкулезом с высокой частотой ЛДГ (>3%) и разделены на три части. Одну часть использовали непосредственно для анализа T-SPOT; другую часть обрабатывали моноклональным антителом против PD-L1 (α-PD-L1, CD274 клон MIh2; eBioscience, 5 мкг/мл) в течение 1 ч с последующим удалением несвязавшихся антител промывкой клеток и анализом T-SPOT, и последняя часть была обнаружена T-SPOT после удаления ЛДГ иммуномагнитным методом. Результаты показали, что по сравнению с группой, не получавшей лечения, блокада PD-L1 моноклональным антителом значительно увеличивала количество ISC, как в ответ на ESAT-6 ( P = 0.0042) и CFP-10 ( P = 0,0176). Количество ISC в группе, получавшей α-PD-L1, не имело существенной разницы по сравнению с группой, у которой не было LDG (рис. 7A, B). Тем не менее, мы обнаружили увеличение общего количества ISCs в группе с удаленным LDG по сравнению с группой, получавшей α-PD-L1 ( P = 0,0165, рисунок 7C).

Рисунок 7. Блокирование сигнала лиганда запрограммированной смерти 1 (PD-L1) увеличивало количество Т-клеток, секретирующих интерферон-γ (ISC). Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) собирали у больных туберкулезом ( n = 11) и обрабатывали моноклональными антителами против PD-L1 или удаляли гранулоциты низкой плотности (ЛДГ) методом иммуномагнитных шариков.Эти предварительно обработанные РВМС использовали вместе с необработанными РВМС для анализа T-SPOT. Было подсчитано количество ISC в ответ на (A) ESAT-6 и (B) CFP-10 и (C) общее количество ISC в ответ как на ESAT-6, так и на CFP-10. LDG от больных туберкулезом ( n = 12) выделяли и обрабатывали моноклональным антителом против PD-L1 или без него с последующим добавлением в аутологичные свежесобранные РВМС. Эти РВМС с экзогенным LDG использовали вместе с необработанными РВМС для анализа T-SPOT.Было подсчитано количество ISC в ответ на (D) ESAT-6 и (E) CFP-10 и (F) общее количество ISC в ответ на ESAT-6 и CFP-10. Статистическую значимость определяли с помощью парного теста Стьюдента t -критерия.

Чтобы дополнительно подтвердить, что именно молекулы PD-L1 на ЛДГ играют ключевую роль в этом процессе, блокаду PD-L1 проводили специально на ЛДГ. Были отобраны больные туберкулезом с низкой частотой ЛДГ (<3%).Периферическую кровь собирали у больных туберкулезом с низкой частотой LDG (<3%) и инфицировали убитыми нагреванием Mtb , чтобы вызвать увеличение LDG. РВМС выделяли, а ЛДГ очищали методом иммуномагнитной отрицательной сортировки. Очищенные ЛДГ обрабатывали моноклональным антителом против PD-L1 (5 мкг/мл) или без него в течение 1 часа. После удаления несвязанных антител такое же количество LDG, обработанных или не обработанных антителом PD-L1, добавляли к свежесобранным аутологичным PBMC до конечной пропорции 10–20%.Наконец, смесь PBMC и экзогенных LDG использовали для анализа T-SPOT. Результаты показали, что по сравнению с добавлением необработанных LDG добавление LDG, обработанных антителом PD-L1, значительно увеличивало количество ISC в PBMC как в ответ на ESAT-6 ( P = 0,002), так и в ответ на CFP-10. ( P = 0,0025) (рис. 7D-F).

Обсуждение

Когда человеческий организм инфицирован Mtb , активируется иммунный ответ, и активируются специфические иммунные эффекторные клетки и клетки памяти, нацеленные на Mtb .При повторном воздействии того же антигена эти клетки памяти будут быстро активироваться и секретировать большое количество IFN-γ. Таким образом, если мы стимулируем иммунные клетки в периферической крови с помощью антигенов Mtb , мы можем судить о том, инфицирован ли тестируемый человек Mtb , определяя Т-клетки, секретирующие IFN-γ, или уровни IFN-γ. Этот метод называется анализом высвобождения IFN-γ (IGRA). В соответствии с различными методами обработки образцов и обнаружения IFN-γ, IGRA можно разделить на анализ высвобождения гамма-излучения QuantiFERON и анализ T-SPOT TB.Для анализа высвобождения гамма-излучения QuantiFERON цельную кровь стимулировали антигенами Mtb , а уровни IFN-γ в плазме определяли с помощью ELISA или хемилюминесценции.

T-SPOT представляет собой метод, в котором используется специфический антиген Mtb для стимуляции и активации Mtb -специфических Т-клеток в РВМС с последующим определением количества клеток, секретирующих IFN-γ, методом ELISPOT. В этом исследовании использовался коммерческий набор для обнаружения T-SPOT. Два антигена, которые специфически экспрессируются в Mtb , ESAT-6 и CFP-10, использовали в этом наборе для активации Mtb -специфических Т-клеток в РВМС.Также были созданы отрицательный контроль без стимуляции и положительный контроль со стимуляцией ФГА. Анализ T-SPOT в настоящее время является наиболее чувствительной и наиболее часто используемой технологией для обнаружения инфекции Mtb . Однако он чувствителен к различным факторам воздействия, таким как иммунный статус пациентов и активность, чистота и количество РВМС. Предыдущие исследования показали, что ложноотрицательный результат является одной из основных проблем, возникающих при анализе T-SPOT (Nguyen et al., 2018; Li et al., 2019).

LDG представляет собой популяцию полиморфноядерных гранулоцитов с более низкой плотностью, которая располагается в слое РВМС после центрифугирования в градиенте плотности. Установлено, что частоты ЛДГ достоверно повышены у пациентов с различными заболеваниями, в том числе туберкулезом, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями (Balbi et al., 2018; Ho, Leung, 2018; Lee et al., 2018). Поскольку пациенты с этими заболеваниями являются основной популяцией, получающей анализ T-SPOT, мы хотим знать, повлияют ли LDG, смешанные с PBMC, на обнаружение T-SPOT.В этом исследовании мы впервые наблюдали взаимосвязь между частотой LDG и положительным уровнем анализа T-SPOT у больных туберкулезом. Результаты показали, что положительная частота теста T-SPOT и ISCs у пациентов с высокой частотой LDG была значительно ниже, чем у пациентов с низкой частотой LDG.

Чтобы объяснить это явление, мы сначала исследовали, секретируют ли сами ЛДГ IFN-γ в ответ на стимуляцию антигенами Mtb . Наши результаты показали, что LDG не секретируют IFN-γ независимо от того, стимулируются они антигенами Mtb или нет.Следовательно, снижение относительного количества Т-клеток должно быть одним из факторов, влияющих на результаты теста T-SPOT у пациентов с высокой частотой ЛДГ.

Однако мы обнаружили, что изменение относительного числа Т-клеток не может полностью объяснить уменьшение Mtb -специфических ISC, потому что уменьшение ISC было значительно больше, чем уменьшение T-клеток. Следовательно, ЛДГ могут иметь некоторые другие механизмы ингибирования продукции IFN-γ в Т-клетках. Чтобы подтвердить это предположение, анализы T-SPOT были выполнены в условиях удаления LDG в PBMC и экзогенного добавления очищенного LDG в PBMC с одинаковым количеством мононуклеарных клеток в каждой системе обнаружения.Результаты показали, что после удаления ЛДГ количество ИСК в том же количестве мононуклеарных клеток значительно увеличилось. Положительный показатель анализа T-SPOT также увеличился. Однако разница незначительна из-за относительно небольшого числа отрицательных образцов T-SPOT у больных туберкулезом. С другой стороны, когда очищенные LDG были добавлены к аутологичным PBMC, количество ISCs в том же количестве PBMC значительно уменьшилось, и частота положительных результатов анализа T-SPOT также значительно снизилась.Эти результаты подтверждают, что ЛДГ действительно могут ингибировать секрецию IFN-γ в Т-клетках посредством некоторого механизма. Однако предыдущее исследование Zhang et al. сообщили об обратном влиянии удаления LDG на анализ T-SPOT (Zhang et al., 2017). В этом исследовании ЛДГ удаляли методом прилипания РВМС и методом оседания цельной крови. Однако, учитывая, что адгезионная способность моноцитов и В-лимфоцитов выше, чем у гранулоцитов, эти два метода удаляют не только ЛДГ, но и моноциты и В-лимфоциты, даже некоторые Т-клетки.Таким образом, основная причина несоответствия между этими двумя исследованиями может быть связана с различием в методах удаления клеток.

В настоящее время большое внимание уделяется ролям подмножества LDG. Однако функция ЛДГ непостоянна при различных заболеваниях. При некоторых заболеваниях, таких как васкулит, ассоциированный с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами, и хроническая гранулематозная болезнь, они были описаны как провоспалительные клетки (Denny et al., 2010; Grayson et al., 2015). Однако они оказывали супрессивное действие на Т-клетки и были названы супрессорными клетками полиморфноядерного миелоидного происхождения (PMN-MDSC) при некоторых солидных опухолях и гемобластозах (Sagiv et al., 2015; Моисей и Брандау, 2016). Более того, при одном и том же заболевании существовали противоречивые сообщения о функции и роли ЛДГ. Например, LDG у пациентов с СКВ были названы PMN-MDSC Wu et al. (2016), хотя Рахман и соавт. считают их провоспалительными клетками. (2019). До настоящего времени функция ЛДГ при туберкулезе остается невыясненной.

Для выяснения молекулярного механизма ЛДГ, ингибирующего продукцию IFN-γ, мы определили уровни основных негативных иммунорегуляторных молекул, включая IL-10, TIGIT, TIM-3, PD-1 и PD-L1 в ЛДГ. .Результаты показали, что уровень экспрессии PD-L1 на LDG был значительно повышен. PD-L1 является лигандом PD-1 и одной из основных негативных костимулирующих молекул. PD-1 в основном экспрессируется на Т-клетках и предназначен для негативной регуляции активации и пролиферации Т-клеток в качестве ингибирующей молекулы. В последние годы несколько исследований подчеркнули критическую роль пути PD-1/PD-L1 при туберкулезе (Jurado et al., 2008; Alvarez et al., 2010; Singh et al., 2013, 2014, 2017).Было продемонстрировано, что PD-1 сильно экспрессируется на Т-клетках у больных туберкулезом, и сообщалось, что уровни PD-1 на Т-клетках коррелируют с нарушением функций Т-клеток и тяжестью туберкулеза. Следовательно, может ли ЛДГ ингибировать выработку и секрецию IFN-γ в Т-клетках посредством высоко экспрессированного PD-L1?

Результаты показали, что подавляющий эффект LDG на ISCs был значительно снижен, когда сигнал PD-L1 был специфически заблокирован моноклональным антителом против PD-L1.Эти результаты показали, что LDG могут подавлять продукцию IFN-γ в Т-клетках посредством сигнала PD-L1. Тем не менее, мы также обнаружили увеличение общего количества ISCs в группе с удаленным LDG по сравнению с группой, получавшей α-PD-L1, что позволяет предположить, что LDG также могут влиять на продукцию IFN-γ Т-клетками через некоторые другие механизмы.

Наши предыдущие исследования показали, что ЛДГ у больных туберкулезом представляют собой активированные зрелые нейтрофилы, возникшие в результате активации in situ периферических нейтрофилов (Su et al., 2019) с повышенным уровнем мембранных CD66b, CD15 и CD16. В этом исследовании мы демонстрируем, что ЛДГ у больных туберкулезом могут выполнять иммуносупрессивную роль в отношении Т-клеток. В соответствии с нашими выводами было обнаружено, что аналогичная подгруппа зрелых нейтрофилов с фенотипом CD66b + /CD11b + /CD16 + проявляет мощную иммуносупрессивную активность в подавлении пролиферации и продукции IFN-γ Т-клеток у пациентов с солидной болезнью. рак (Lang et al., 2018).

Таким образом, наше исследование показывает, что ЛДГ у больных туберкулезом могут подавлять продукцию IFN-γ Т-клетками и приводить к снижению чувствительности обнаружения анализа T-SPOT.Более того, наше исследование показало, что PD-L1 сильно экспрессируется в ЛДГ и играет важную роль в ингибировании функции Т-клеток. Кроме того, наше исследование также показало, что количество положительных результатов теста T-SPOT можно улучшить путем удаления LDG из PBMC или обработки PBMC анти-PD-L1 McAb перед анализом T-SPOT. Это исследование предполагает, что отрицательные результаты T-SPOT могут быть ненадежными у пациентов с высокой частотой LDG. Для пациентов с высокой степенью подозрения на инфекцию Mtb следует повторно протестировать T-SPOT после удаления LDG из PBMC или предварительной обработки PBMC анти-PD-L1 McAb.

Также отмечается высокая частота ЛДГ в периферической крови пациентов с ВИЧ-инфекцией, раком и аутоиммунными заболеваниями, и эти пациенты составляют основную популяцию, получающую тест T-SPOT из-за высокого риска активации туберкулеза; еще предстоит выяснить, имеют ли ЛДГ у этих пациентов аналогичную функцию. Насколько нам известно, ни одно из предыдущих исследований не изучало роль LDG в анализе T-SPOT. Наше исследование впервые показывает, что ЛДГ являются одним из важных факторов, регулирующих продукцию IFN-γ в Т-клетках и влияющих на результат анализа T-SPOT.Хотя необходимы дополнительные доказательства, наше исследование также впервые показало, что ЛДГ у больных туберкулезом могут функционировать как PMN-MDSC в регуляции функции Т-клеток.

Заявление о доступности данных

Оригинальные вклады, представленные в исследовании, включены в статью/дополнительный материал, дальнейшие запросы можно направлять соответствующему автору/ам.

Вклад авторов

JL и QL задумали и разработали эксперимент.JR, RS и YP провели эксперименты. YG и ZH внесли значительный вклад в сбор данных, анализ и интерпретацию данных. JR составил рукопись. YG, ZH, YY, YG, JL и LZ помогли провести анализ с конструктивными обсуждениями. Все авторы приняли на себя ответственность за все содержание представленной рукописи и одобрили ее.

Финансирование

Эта работа была поддержана проектом для высококвалифицированных специалистов в области научных и технологических инноваций в провинции Цзянси «План удвоенной тысячи» (грант No.jxsq2019201024), гранты Национального фонда естественных наук Китая (грант № 81760002), Проект для академических и технических руководителей основных дисциплин провинции Цзянси (грант № 20172BCB22026), Ключевые проекты Фонда естественных наук Цзянси (гранты № , 20171ACB2003 и 20202BAB216001), а также Научно-технический проект Комиссии по здравоохранению и планированию семьи китайской провинции Цзянси (номер гранта: 20203091).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Альварес, И.Б., Паскинелли, В., Хурадо, Дж.О., Аббате, Э., Муселла, Р.М., де ла Баррера, С.С., и соавт. (2010). Роль, которую играет путь запрограммированной смерти-1 – лиганд запрограммированной смерти во время врожденного иммунитета против Mycobacterium tuberculosis . Дж. Заражение. Дис. 202, 524–532. дои: 10.1086/654932

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бальби Г., Мачадо-Рибейро Ф., Маркес К., Синьорелли Ф.и Леви, Р. А. (2018). Взаимодействие туберкулеза и системной красной волчанки. Курс. мнение Ревматол. 30, 395–402. doi: 10.1097/BOR.0000000000000493

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Китайская медицинская ассоциация (2005 г.). Руководство по клинической диагностике и лечению: туберкулез, раздел , 1-е изд., Пекин: Народное медицинское издательство, 9–32.

Академия Google

Клоук, Т., Мундер, М., Тейлор Г., Мюллер И. и Кропф П. (2012). Характеристика новой популяции гранулоцитов низкой плотности, связанных с тяжестью заболевания при ВИЧ-1-инфекции. PLoS One 7:e48939. doi: 10.1371/journal.pone.0048939

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дэн, Ю., Йе, Дж., Луо, К., Хуанг, З., Пэн, Ю., Сюн, Г., и др. (2016). Гранулоциты низкой плотности повышены при микобактериальной инфекции и связаны с тяжестью туберкулеза. PLoS One 11:e153567. doi: 10.1371/journal.pone.0153567

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Денни, М.Ф., Ялаварти, С., Чжао, В., Такер, С.Г., Андерсон, М., Сэнди, А.Р., и соавт. (2010). Отдельная подгруппа провоспалительных нейтрофилов, выделенных у пациентов с системной красной волчанкой, вызывает повреждение сосудов и синтезирует интерфероны I типа. Дж. Иммунол. 184, 3284–3297. doi: 10.4049/jimmunol.09

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Грейсон, П.С., Кармона-Ривера, С., Сюй, Л., Лим, Н., Гао, З., Асаре, А.Л., и соавт. (2015). Экспрессия генов, связанных с нейтрофилами, и гранулоциты низкой плотности связаны с активностью заболевания и реакцией на лечение при васкулите, ассоциированном с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами. Артрит. Ревматол. 67, 1922–1932 гг. дои: 10.1002/арт.39153

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Джаяраман П., Жак М. К., Чжу С., Стебленко К. М., Стоуэлл Б. Л., Мади А., и другие. (2016). TIM3 опосредует истощение Т-клеток во время инфекции Mycobacterium tuberculosis . PLoS Pathog. 12:e1005490. doi: 10.1371/journal.ppat.1005490

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хурадо, Дж. О., Альварес, И. Б., Паскинелли, В., Мартинес, Г. Дж., Кирога, М. Ф., Аббате, Э., и соавт. (2008). Запрограммированная смерть (PD)-1: путь PD-лиганда 1/PD-лиганда 2 ингибирует эффекторные функции Т-клеток при туберкулезе человека. Дж.Иммунол. 181, 116–125. doi: 10.4049/jиммунол.181.1.116

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ла Манна, М. П., Орландо, В., Парабоски, Э. М., Тамбурини, Б., Ди Карло, П., Касио, А., и др. (2019). Mycobacterium tuberculosis стимулирует рост нейтрофилов низкой плотности, обладающих регуляторной активностью. Перед. Иммунол. 10:2761. doi: 10.3389/fimmu.2019.02761

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ланг, С., Брудерек К., Каспар С., Хёинг Б., Канаан О., Доминас Н. и соавт. (2018). Клиническая значимость и супрессорная способность субпопуляций супрессорных клеток миелоидного происхождения человека. клин. Рак рез. 24, 4834–4844. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-17-3726

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Lee, C.K., Wong, S., Lui, G., Tang, W., Tam, L.S., Ip, M., et al. (2018). Проспективное исследование для мониторинга туберкулеза во время терапии факторами некроза опухоли у пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника и иммуноопосредованными воспалительными заболеваниями. Дж. Кронс. Колит. 12, 954–962. doi: 10.1093/ecco-jcc/jjy057

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, К., Ян, С., Цзян, З., Лю, С., Лю, Дж., Фань, С., и др. (2019). Количественное исследование факторов, имеющих отношение к точечному тесту Т-клеток на туберкулезную инфекцию при активном туберкулезе. BMC Заражение. Дис. 19:673. doi: 10.1186/s12879-019-4310-y

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Моисей, К.и Брандау, С. (2016). Нейтрофилы человека: их роль в развитии рака и связь с супрессорными клетками миелоидного происхождения. Семин. Иммунол. 28, 187–196. doi: 10.1016/j.smim.2016.03.018

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нгуен, Д. Т., Титер, Л. Д., Грейвс, Дж., и Грависс, Э. А. (2018). Характеристики, связанные с отрицательными результатами анализа высвобождения гамма-интерферона у больных туберкулезом с подтвержденным посевом, Техас, США, 2013–2015 гг. Аварийный.Заразить. Дис. 24, 534–540. дои: 10.3201/eid2403.171633

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Рахман С., Сагар Д., Ханна Р. Н., Лайтфут Ю. Л., Мистри П., Смит С. К. и др. (2019). Гранулоциты низкой плотности активируют Т-клетки и демонстрируют несупрессивную роль при системной красной волчанке. Энн. Реум. Дис. 78, 957–966. doi: 10.1136/annrheumdis-2018-214620

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сагив, Й.Ю., Михаэли Дж., Асси С., Мишалян И., Кисос Х., Леви Л. и др. (2015). Фенотипическое разнообразие и пластичность субпопуляций циркулирующих нейтрофилов при раке. Cell Rep. 10, 562–573. doi: 10.1016/j.celrep.2014.12.039

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сингх А., Дей А. Б., Мохан А. и Митра Д. К. (2014). Рецептор программируемой смерти-1 подавляет продуцирующие γ-IFN NKT-клетки при туберкулезе человека. Туберкулез 94, 197–206.doi: 10.1016/j.tube.2014.01.005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сингх, А., Мохан, А., Дей, А.Б., и Митра, Д.К. (2013). Ингибирование пути запрограммированной смерти 1 спасает Mycobacterium tuberculosis , специфичные для гамма-интерферона Т-клетки, продуцирующие апоптоз, у пациентов с туберкулезом легких. Дж. Заражение. Дис. 208, 603–615. doi: 10.1093/infdis/jit206

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сингх, А., Мохан, А., Дей, А.Б., и Митра, Д.К. (2017). Запрограммированная смерть-1 + Т-клетки ингибируют эффекторные Т-клетки в патологическом очаге милиарного туберкулеза. клин. Эксп. Иммунол. 187, 269–283. doi: 10.1111/cei.12871

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сингхания, А., Уилкинсон, Р. Дж., Родриг, М., Халдар, П., и О’Гарра, А. (2018). Ценность транскриптомики в расширении знаний об иммунном ответе и диагностике туберкулеза. Нац. Иммунол. 19, 1159–1168. doi: 10.1038/s41590-018-0225-9

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Su, R., Peng, Y., Deng, Z., Deng, Y., Ye, J., Guo, Y., et al. (2019). Инфекция Mycobacterium tuberculosis индуцирует образование гранулоцитов низкой плотности, способствуя образованию нейтрофильных внеклеточных ловушек через путь АФК. Перед. микробиол. 10:1468. doi: 10.3389/fmicb.2019.01468

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ван, Ф., Hou, H., Wu, S., Tang, Q., Liu, W., Huang, M., et al. (2015). Уровни экспрессии TIGIT на человеческих NK-клетках коррелируют с функциональной гетерогенностью среди здоровых людей. евро. Дж Иммунол. 45, 2886–2897. doi: 10.1002/eji.201545480

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2018 г.). Латентная туберкулезная инфекция: обновленные и сводные рекомендации по программному ведению. Женева: ВОЗ.

Академия Google

Всемирная организация здравоохранения [ВОЗ] (2019 г.). Global Tuberculosis Report 2019. Женева: ВОЗ.

Академия Google

Wu, H., Zhen, Y., Ma, Z., Li, H., Yu, J., Xu, Z., et al. (2016). Зависимое от аргиназы-1 стимулирование дифференцировки Th27 и прогрессирования заболевания с помощью MDSC при системной красной волчанке. науч. Перевод Мед. 8, 331р–340р. doi: 10.1126/scitranslmed.aae0482

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжан, С. Г., Сун, Ю. X., Шу, X. М., Шен, Х.L., Yang, H.B., Duo, R.X., et al. (2017). Простой метод удаления гранулоцитов низкой плотности для очистки Т-лимфоцитов от мононуклеаров периферической крови. Дж. Чжэцзян. ун-т науч. В 18, 605–614. doi: 10.1631/jzus.B1600064

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

КвантиФЕРОН-ТБ Золото — КвантиФЕРОН

Что такое QuantiFERON-TB Gold?

QuantiFERON-TB Gold (QFT) — это простой анализ крови, помогающий обнаружить Mycobacterium tuberculosis , бактерии, вызывающие туберкулез (ТБ).QFT – это анализ высвобождения гамма-интерферона (IFN-γ), широко известный как IGRA, который является современной альтернативой туберкулиновой кожной пробе (TST, PPD или Манту). В отличие от TST, QFT является контролируемым лабораторным тестом, который требует только одного посещения пациента и не зависит от предыдущей вакцинации против бациллы Кальметта-Герена (BCG).

QFT обладает высокой специфичностью и чувствительностью: положительный результат является сильным предиктором истинной инфекции M.tuberculosis . Однако, как и TST и другие IGRA, QFT не может провести различие между активным туберкулезом и латентной туберкулезной инфекцией и предназначен для использования с оценкой риска, рентгенографией и другими медицинскими и диагностическими исследованиями.Как и любое диагностическое средство, QFT не может заменить клиническое суждение.

Руководящие принципы Центров по контролю и профилактике заболеваний США (CDC) рекомендуют использовать IGRA во всех ситуациях, в которых исторически использовалась ТКП, при этом IGRA является предпочтительным тестом для лиц, которые были вакцинированы БЦЖ или которые вряд ли вернутся для определения результатов ТКП (1 ).

 


Преимущество QFT – три пробирки, один четкий результат

В

QFT используются уникальные пробирки для забора крови, которые обеспечивают немедленную экспозицию жизнеспособных лимфоцитов крови к высокоспецифическим антигенам ТБ (ESAT-6/CFP-10/TB-7.7(p4)) и контрольные образцы, нанесенные на внутреннюю поверхность пробирок. Воздействие антигена вызывает поддающийся количественной оценке иммунный ответ, помогающий в диагностике туберкулезной инфекции.

Нил трубка

Отрицательный контроль для корректировки фонового IFN-γ

TB Пробирка с антигеном

Для выявления ответов CD4+ Т-клеток на антигены туберкулеза

Пробирка с митогеном

Низкий ответ может указывать на неспособность генерировать IFN-γ


QFT — наиболее клинически испытанная и проверенная IGRA.

QuantiFERON-TB Gold — наиболее клинически испытанный и проверенный IGRA из доступных (2). Было продано более 30 миллионов тестов QFT в более чем 130 странах, в том числе более 7 миллионов в 2015 году. Доверьтесь единственному анализу крови на туберкулез, который предлагает:

  • Наиболее точные и воспроизводимые результаты для туберкулезной инфекции
  • Достоверность более 1200 клинических и научных исследований
  • Удобная и объективная технология ELISA
  • Однократное тестирование

QFT обеспечивает простой сбор крови и удобный рабочий процесс

QFT использует сбор цельной крови, чтобы сделать инкубацию Т-клеток простой и быстрой.После забора крови образец необходимо инкубировать, что может происходить на месте или в испытательной лаборатории, что обеспечивает полную гибкость и удобство вашей практики.


Преимущества технологии QuantiFERON

  • Использование цельной крови в QFT делает инкубацию Т-клеток простой и быстрой и сокращает трудозатраты
  • Нет утомительного выделения, промывки, подсчета, разбавления или культивирования лимфоцитов
  • Технология, разработанная для клинического скрининга большого количества образцов, обеспечивающая стандарты, контроли и воспроизводимость анализа, необходимые для клинической диагностики

Региональные учебные центры по фтизиатрии

Ценные ресурсы доступны в Центрах по контролю и профилактике заболеваний США (CDC) Отдел ликвидации туберкулеза CDC профинансировал пять региональных учебных и медицинских консультационных центров (RTMCC).Эти центры предоставляют обучение, техническую помощь, медицинские консультации и разработку учебных материалов для программ по борьбе с ТБ и поставщиков медицинских услуг (3). Чтобы узнать больше о RTMCC, действующем в вашем регионе, посетите сайт www.cdc.gov/tb/education/rtmc/default.htm.


Загрузить брошюру QuantiFERON-TB Gold


 

Запрос дополнительной информации

Связаться с нами

Ссылки

  1. Центры по контролю и профилактике заболеваний.(2010) Обновленные рекомендации по использованию анализов высвобождения гамма-интерферона для выявления инфекции Mycobacterium tuberculosis — США. MMWR 59(RR05), 1.
  2. www.gnowee.net. Справочная библиотека QuantiFERON: (по состоянию на 13 апреля 2017 г.).
  3. Веб-сайт региональных учебных и медицинских консультационных центров Центров контроля заболеваний (RTMCC). www.cdc.gov/tb/education/rtmc/default.html. (по состоянию на 13 апреля 2017 г.).

Скрининг на туберкулез (цельная кровь)

Есть ли у этого теста другие названия?

Анализ высвобождения гамма-интерферона (IGRA), тест QuantiFERON, T-spot, T-SPOT


Что это за тест?

Этот тест показывает, инфицированы ли вы туберкулезом (ТБ).Туберкулез – очень заразная бактериальная инфекция, которая передается воздушно-капельным путем. Можно иметь неактивный (латентный) туберкулез и не чувствовать себя больным или иметь заметные симптомы. Или у вас может быть активная форма туберкулеза с симптомами. Люди с латентным туберкулезом не заразны.

Этот тест является более точным и специфичным, чем кожные тесты на туберкулез. Результаты готовы через 24 часа. Кроме того, вы можете пройти этот скрининговый тест, если вы были вакцинированы против туберкулеза. Вакцина против туберкулеза называется бациллой Кальметта-Герена (БЦЖ).Кожная проба не рекомендуется, если вы были привиты. Кожный тест может привести к ложноположительному результату теста у людей, которым была сделана прививка от туберкулеза. Вакцина не приведет к ложноположительному результату теста IGRA.

Существует 2 теста на ТБ цельной крови, известных как тесты на высвобождение гамма-интерферона (IGRA), которые были одобрены FDA и доступны в США для скрининга на ТБ. Они:

  • Внутрипробирочный тест QuantiFERON TB Gold (QFT-GIT)
  • Тест на туберкулез T-SPOT (T-Spot)

Зачем мне этот тест?

Вам может понадобиться этот тест, если вы недавно контактировали с больным туберкулезом или если ваш поставщик медицинских услуг считает, что у вас может быть туберкулезная инфекция.

Симптомы туберкулеза могут включать:

  • Кашель
  • Лихорадка
  • Ночные толстовки
  • Необъяснимая потеря веса
  • Кровавый кашель
  • Боль в груди
  • Усталость
  • Одышка

ТБ обычно поражает легкие. Но он может распространиться на другие части вашего тела, такие как суставы, позвоночник, мозг и почки, и вызвать больше симптомов.

Вы также можете пройти этот тест, если вы:

  • Наличие ВИЧ или другого заболевания, ослабляющего вашу иммунную систему
  • Употреблять запрещенные наркотики
  • Живите или работайте в местах с более высоким уровнем заражения туберкулезом, например, в тюрьме или доме престарелых
  • Нужно начать принимать лекарство, подавляющее вашу иммунную систему
  • Недавно эмигрировавшие из районов, где туберкулез более распространен, например, из некоторых стран Восточной Европы или Латинской Америки
  • Являетесь работником здравоохранения и нуждаетесь в этом тесте в рамках программы инфекционного контроля в вашем учреждении 

Какие еще тесты можно пройти вместе с этим тестом?

Если у вас положительный результат теста на туберкулез, вам, вероятно, также потребуется рентген грудной клетки, мазок мокроты и посев на туберкулез, чтобы выяснить, есть ли у вас активный или латентный туберкулез.

Вы также можете пройти тестирование на ВИЧ после положительного результата теста на туберкулез.


Что означают результаты моего теста?

Результаты теста могут различаться в зависимости от вашего возраста, пола, истории болезни, метода, использованного для теста, и других факторов. Результаты вашего теста могут не означать, что у вас есть проблема. Спросите своего поставщика медицинских услуг, что результаты ваших анализов означают для вас.

Положительный результат теста IGRA означает, что у вас может быть 1 из 2 типов туберкулеза:

  • Неактивный (латентный) туберкулез. Это означает, что бактерии туберкулеза присутствуют в вашем организме, но не активны и не вызывают симптомов. Вы не заразны, хотя в будущем у вас может развиться туберкулез.
  • Активный туберкулез или заболевание туберкулезом. Это означает, что бактерии туберкулеза активны в вашем организме, и вы заразны.

Отрицательный результат теста означает, что туберкулезная инфекция (активная или неактивная) маловероятна. Но вы можете получить отрицательный результат, если у вас очень запущенный туберкулез.Это связано с тем, что на более поздних стадиях заболевание может подавлять иммунную реакцию, что приводит к положительному результату теста IGRA.


Как проводится этот тест?

Тест проводится с образцом крови. Игла используется для забора крови из вены на руке или кисти.


Представляет ли этот тест какие-либо риски?

Анализ крови с помощью иглы сопряжен с определенным риском. К ним относятся кровотечение, инфекция, кровоподтеки и головокружение.Когда игла уколет вашу руку или кисть, вы можете почувствовать легкое жжение или боль. После этого сайт может болеть.


Что может повлиять на результаты моего теста?

На результаты вашего теста может повлиять, если у вас есть опухоли, требующие лечения лекарствами, подавляющими вашу иммунную систему. На ваши результаты также может повлиять наличие у вас ВИЧ, СПИДа или другого заболевания крови.


Как мне подготовиться к этому тесту?

Вам не нужно готовиться к этому тесту.Убедитесь, что ваш лечащий врач знает обо всех лекарствах, травах, витаминах и добавках, которые вы принимаете. Это включает в себя лекарства, которые не требуют рецепта, и любые запрещенные наркотики, которые вы можете использовать.


© 2000-2021 The StayWell Company, LLC. Все права защищены. Эта информация не предназначена для замены профессиональной медицинской помощи. Всегда следуйте инструкциям своего лечащего врача.

Тестирование на туберкулез | Health Answers

Что такое туберкулез?

Туберкулез, также известный как ТБ, представляет собой инфекционное заболевание, поражающее легкие и, возможно, головной мозг, почки и позвоночник.Его вызывает бактерия Mycobacterium tuberculosis. Когда человек с туберкулезом кашляет, чихает или говорит, бактерии туберкулеза попадают в воздух и могут заразить окружающих, если они вдыхают бактерии. Общие симптомы включают кашель, который длится более трех недель, кашель с кровью и боль в груди. Туберкулез может быть активным с симптомами или латентно (неактивным) в организме в течение многих лет. Если у вас латентный туберкулез, риск его перехода в активную форму возрастает, если иммунная система организма ослаблена другим заболеванием, например, вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

Число людей, у которых диагностирован туберкулез, медленно уменьшалось на два процента каждый год в течение последних нескольких десятилетий. В Соединенных Штатах 70% больных туберкулезом родились за пределами страны. По состоянию на 2018 г. наибольшее число новых случаев ТБ было зарегистрировано в Индии, Китае, Индонезии, Филиппинах, Пакистане, Нигерии, Бангладеш и Южной Африке.

Люди чаще заражаются туберкулезом от людей, с которыми они живут или работают, а не от общественных мест. Активный и латентный туберкулез можно вылечить путем лечения несколькими препаратами, принимаемыми в течение нескольких недель или месяцев.Человек перестает быть заразным после двух недель лечения. Если туберкулез не лечить должным образом, он может привести к летальному исходу.

Как диагностируется туберкулез?

Для диагностики туберкулеза можно использовать кожную пробу или анализ крови. Ваш поставщик медицинских услуг может помочь определить, какой тест подходит именно вам.

  • Туберкулиновая кожная проба Манту проводится за два посещения врача. При первом посещении под кожу предплечья вводится небольшое количество туберкулина, образуя небольшой приподнятый участок.Через 48-72 часа ваш лечащий врач проверит кожу на наличие ощутимых, приподнятых, затвердевших участков или припухлостей в месте инъекции. Если тест не читается в течение 72 часов, его следует повторить. Это предпочтительный тест на туберкулез для детей младше пяти лет.
  • Доступны два анализа крови на ТБ: тест QuantiFERON®–TB Gold In-Tube и тест T-SPOT® TB. Для анализа крови вам потребуется всего один визит к врачу. Во время визита ваш врач возьмет кровь, а затем отправит ее в лабораторию на анализ.Анализы крови предпочтительны для людей, у которых есть проблемы с повторным визитом к врачу.

Отрицательный результат анализа кожи или крови означает, что реакции на тест не было, и маловероятно, что у вас активный или латентный туберкулез. Положительный результат теста на туберкулез при любом из этих тестов означает, что у вас туберкулез, но тесты не различают активный и латентный типы туберкулеза.

Ваш поставщик медицинских услуг может заказать дополнительные анализы, чтобы определить, какой тип туберкулеза у вас есть.К ним относятся рентген грудной клетки или (компьютерная томография) компьютерная томография для подтверждения любых изменений в легких, вызванных туберкулезом. Анализ мокроты также может определить, активен ли туберкулез при наличии бактерий.

Где пройти обследование на туберкулез

Walgreens предлагает тестирование на туберкулез в определенных местах. Перейдите на Walgreens.com или воспользуйтесь приложением Walgreens и выберите Find Care, чтобы найти ближайший к вам сайт. Офисы по борьбе с туберкулезом, расположенные в различных городах, штатах и ​​территориях, а также клиники первичной и неотложной медицинской помощи в вашем районе также могут предлагать тестирование на туберкулез.

Опубликовано 19 ноября 2020 г.

Каталожные номера:

Корниа П., Липский Б.А. 2020. Коклюшная инфекция у подростков и взрослых: лечение и профилактика. 02 18. По состоянию на 06.05.2020. https://www.uptodate.com/contents/pertussis-infection-in-adolescents-and-adults-treatment-and-prevention?search=whooping%20cough%20vaccine&topicRef=5997&source=see_link.

Коклюшная инфекция: эпидемиология, микробиология и патогенез.05 2020. По состоянию на 06 04 2020. https://www.uptodate.com/contents/pertussis-infection-epidemiology-microbiology-and-pathogenesis?search=whooping%20cough%20adult&topicRef=8044&source=see_link.

Отдел ликвидации туберкулеза. 2017. Центр по контролю и профилактике заболеваний: Офисы по борьбе с ТБ. 02 17. По состоянию на 30 июня 2020 г. https://www.cdc.gov/tb/links/tboffices.htm.

Центр по контролю и профилактике заболеваний: Туберкулиновые кожные пробы.04.05.2016. По состоянию на 29.06.2020. https://www.cdc.gov/tb/publications/factsheets/testing/skintesting.htm.

Центры по контролю и профилактике заболеваний: вопросы и ответы о туберкулезе. 12 декабря 2012 г. По состоянию на 29 июня 2020 г. https://www.cdc.gov/tb/publications/faqs/qa_introduction.htm#tbprobleminus.

Центры по контролю и профилактике заболеваний: Тенденции в области туберкулеза, 2018 г. 29 октября 2019 г. По состоянию на 26 июня 2020 г. https://www.cdc.gov/tb/publications/factsheets/statistics/tbtrends.хтм.

Друтц, Дж. Э. 2020. UpToDate: Обучение пациентов: вакцины для младенцев и детей в возрасте от 0 до 6 лет. 06 03. По состоянию на 09 сентября 2020 г. https://www.uptodate.com/contents/vaccines-for-infants-and-children-age-0-to-6-years-beyond-the-basics?search=whooping%20cough%20vaccine%20side%20effects&topicRef= 2844&source=see_link#H7.

Хибберд, пл. 2020. UpToDate: Обучение пациентов: вакцины для взрослых (за пределами основ). 01 30. По состоянию на 09 сентября 2020 г. https://www.uptodate.com/contents/adult-vaccines-beyond-the-basics?search=whooping%20cough%20vaccine%20side%20effects&topicRef=1216&source=see_link.

Посох Мэйо. 2019. Клиника Майо: Туберкулез. 01 30. По состоянию на 29 июня 2020 г. https://www.mayoclinic.org/diseases-conditions/tuberculosis/symptoms-causes/syc-20351250.

Nat Ctr по иммунизации и респираторным заболеваниям, Отдел бактериальных заболеваний. 2017. Коклюш (коклюш) Краткие факты. 08 07. По состоянию на 06 05, 2020.https://www.cdc.gov/pertussis/fast-facts.html.

Прививка от коклюша. 15.01.2019. По состоянию на 06.04.2020. https://www.cdc.gov/pertussis/vaccines.html.

Национальный центр иммунизации и респираторных заболеваний. 2020. Рекомендованные прививки для младенцев и детей на 2020 год. 02 03. По состоянию на 06 мая 2020 г. https://www.cdc.gov/vaccines/schedules/easy-to-read/child-easyread.html.

Национальные институты здравоохранения.2020. Медлайн Плюс: Туберкулез. 03 27. По состоянию на 29 июня 2020 г. https://medlineplus.gov/tuberculosis.html#cat_92.

Национальная медицинская библиотека Национального института здравоохранения. 27 марта 2020 г. По состоянию на 26 июня 2020 г. https://medlineplus.gov/tuberculosis.html#cat_93.

NIH: Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний. 2016. Коклюш (коклюш). 05 12. По состоянию на 06.04.2020. https://www.niaid.nih.gov/diseases-conditions/pertussis-whooping-cough.

Всемирная организация здравоохранения. 2017. «Передача научно обоснованных сообщений о вакцинах». Бюллетень Всемирного органа здравоохранения. 670-671. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5689193/.

Всемирная организация здравоохранения: Туберкулез. 24 марта 2020 г. По состоянию на 29 июня 2020 г. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/tuberculosis.

Туберкулез (ТБ) Тестирование | Служба здравоохранения студентов

Нужен тест на туберкулез?

Ближайшие клиники для проведения кожных проб на туберкулез (для проведения кожной пробы на туберкулез требуется 2 посещения: одно для проведения теста и одно для «считывания» результатов теста)

 

Тестирование: вторник, 30 августа 2022 г. 3–4:30м. Образование 212 Тестовое чтение: Четверг, 1 сентября 2022 г. 15-16 часов  
Тестирование: вторник, 6 сентября 2022 г. 15-16:30 Образование 212 Тестовое чтение: Четверг, 8 сентября 2022 г. 15-16 часов  

Стоимость: 20 долларов США – только наличные

 

Нужен тест на туберкулез сейчас? Возможность сдать тест в Службе здравоохранения студентов по индивидуальной записи зависит от наличия тестовых материалов.Пожалуйста, позвоните в наш офис, чтобы узнать: 609-771-2889.


Учащимся необходимо пройти обследование на туберкулез по разным причинам, например:
  • Для клинического/учебного размещения в школе или медицинском учреждении (например, студенты-медсестры, студенты-учителя)
  • Для участия в TCNJ EMS
  • Для удовлетворения медицинских требований TCNJ перед поступлением (относится только к учащимся, ответившим «да» на один или несколько вопросов анкеты для скрининга туберкулеза)
  • После поездки в место с высокой заболеваемостью туберкулезом
  • Контакт с человеком с известным активным заразным туберкулезом (в этом случае, пожалуйста, свяжитесь с нашим офисом по телефону 609-771-2889)

Студенты, прикомандированные к Н.J. Полевой опыт в классе, включая JPE и обучение студентов:
  • Департамент образования штата Нью-Джерси требует от вас предоставить документацию об отрицательном результате теста на ТБ за последние 6 месяцев до вашего первого практического опыта в классе (что обычно происходит на втором или младшем курсе) ИЛИ документацию о положительном тесте на ТБ требуется результат, независимо от того, когда был сделан этот тест.
  • Ежегодное тестирование НЕ требуется.
  • После подачи этой документации повторное тестирование НЕ требуется при переводе из одного школьного округа в другой (в соответствии с нормативными актами штата Нью-Джерси).

Что такое туберкулез (ТБ)?
  • Туберкулез (ТБ) вызывается бактерией под названием Mycobacterium tuberculosis
  • Бактерии обычно поражают легкие, но бактерии туберкулеза могут поражать любую часть тела, например почки, позвоночник и головной мозг.
  • бактерий туберкулеза передаются по воздуху от одного человека к другому. Бактерии туберкулеза попадают в воздух, когда больной туберкулезом легких или горла кашляет, говорит или поет.Люди поблизости могут вдохнуть эти бактерии и заразиться.
  • Люди, больные туберкулезом, чаще всего заражают людей, с которыми они проводят время каждый день. Сюда входят члены семьи, друзья, коллеги или одноклассники.
  • У большинства людей, которые вдыхают бактерии туберкулеза и заражаются, организм способен бороться с бактериями. Бактерии туберкулеза живут в их организме, не вызывая у них болезни. В результате существуют два связанных с туберкулезом состояния: латентная туберкулезная инфекция (ЛТБИ) и заболевание туберкулезом.
  • Латентная инфекция ТБ НЕ заразна для окружающих. Заболевание ТБ МОЖЕТ БЫТЬ заразным и передаваться другим людям.
  • Многие люди с латентной формой туберкулеза никогда не заболевают туберкулезом; у некоторых людей заболевание туберкулезом развивается вскоре после заражения (в течение нескольких недель), прежде чем их иммунная система сможет бороться с бактериями туберкулеза; другие люди могут заболеть спустя годы, когда их иммунная система ослабнет по другой причине.

Что входит в тестирование на туберкулез?
  • Существует два вида тестов, которые используются для выявления бактерий ТБ в организме: кожная проба на ТБ и анализы крови на ТБ .
  • Положительный кожный тест на туберкулез или анализ крови на туберкулез говорит только о том, что человек инфицирован бактериями туберкулеза. Он не говорит о том, есть ли у человека латентная инфекция ТБ или заболевание прогрессировало до ТБ.
  • Если обнаружено, что человек заражен бактериями ТБ, необходимы другие тесты, чтобы определить, есть ли у человека латентная инфекция ТБ или заболевание ТБ, например, рентген грудной клетки.
  • ПРИМЕЧАНИЕ: Если вам недавно сделали прививку, содержащую живой вирус, например вакцину MMR (корь, эпидемический паротит, краснуха), ветряную оспу (ветряную оспу) или вакцину против желтой лихорадки, вы должны подождать 4–6 недель после вакцинации, прежде чем Во избежание ложноотрицательных реакций можно провести тест на туберкулез.Интервал между вакцинацией против COVID-19 и тестированием на туберкулез НЕ обязателен.

Кожный тест на туберкулез:
  • Также называется туберкулиновой кожной пробой (ТКП) Манту (Man-Two).
  • Кожная проба на туберкулез проводится путем введения небольшого количества жидкости (называемой туберкулином) непосредственно под верхний слой кожи в нижней части руки с помощью крошечной иглы и шприца. Эта инъекция создает небольшой приподнятый бугорок на несколько минут.
  • Через 48-72 часа после этого «читается» кожная проба на туберкулез.Считывание может выполняться только медицинским работником, прошедшим специальную подготовку по правильному измерению и интерпретации результатов теста.
  • Почти все могут пройти ТКП, включая младенцев, детей, беременных женщин и людей, живущих с ВИЧ.
  • Людям, у которых была тяжелая кожная реакция на предыдущую кожную пробу на туберкулез, не следует проводить повторную кожную пробу на туберкулез.
  • Тяжелая кожная реакция на ТКП может привести к образованию рубцов.
  • Кожные пробы на туберкулез могут давать ложноположительные результаты у некоторых людей, получивших противотуберкулезную вакцину БЦЖ.Если это произойдет, то нельзя предполагать, что положительный результат от БЦЖ или от латентной туберкулезной инфекции, или от туберкулёзного заболевания. Нужны дополнительные тесты.
  • Кожная проба на туберкулез требует двух визитов к медицинскому работнику, обученному проведению кожной пробы на туберкулез. При первом посещении ставится проба; во время второго визита медицинский работник читает тест.
  • Результат зависит от размера приподнятого, твердого участка или припухлости.
  • Положительный кожный тест: Это означает, что тело человека было инфицировано бактериями туберкулеза.Необходимы дополнительные тесты, чтобы определить, есть ли у человека латентная туберкулезная инфекция или заболевание туберкулезом.
  • Отрицательный кожный тест: Это означает, что организм человека не отреагировал на тест, и маловероятно наличие латентной туберкулезной инфекции или заболевания туберкулезом.

Анализ крови на туберкулез:

  • Также называется анализом высвобождения гамма-интерферона или IGRA
  • Два теста крови на ТБ одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) и доступны в США: тест QuantiFERON®–TB Gold In-Tube (QFT-GIT) и T-SPOT®.Тест на туберкулез (T-Spot).
  • Медицинский работник для студентов возьмет у вас кровь в офисе и отправит ее на анализ в лабораторию за пределами кампуса. Мы заказываем тест T-Spot TB. Лаборатория выставит счет вашему плану медицинского страхования. Мы не знаем, какие личные расходы вы можете понести после оформления страховки. Перед проведением теста лучше всего позвонить в страховой полис и узнать.
  • Получение результатов занимает около недели. Вас уведомят о результатах и ​​предоставят копию отчета о лабораторных испытаниях для вашей документации.
  • Анализы крови на туберкулез являются предпочтительным тестом на туберкулез для людей, получивших противотуберкулезную вакцину, бациллу Кальметта-Герена (БЦЖ).
  • Положительный анализ крови на туберкулез: Это означает, что человек инфицирован бактериями туберкулеза. Необходимы дополнительные тесты, чтобы определить, есть ли у человека латентная туберкулезная инфекция или заболевание туберкулезом.
  • Отрицательный анализ крови на ТБ: Это означает, что кровь человека не отреагировала на анализ и маловероятно наличие латентной ТБ-инфекции или заболевания ТБ.

Положительные результаты теста на туберкулез – что дальше?

  • Если ваш тест окажется положительным, вам назначат медицинское обследование у поставщика медицинских услуг Службы здравоохранения студентов.
  • Необходимы дополнительные анализы, чтобы определить, есть ли у вас латентная туберкулезная инфекция или заболевание туберкулезом. Это включает в себя рентген грудной клетки.
  • Важно, чтобы вы знали, что каждый год несколько студентов TCNJ получают положительный результат теста на туберкулез. У них нет туберкулеза.

Диагностика латентной туберкулезной инфекции:

  • Диагноз латентной туберкулезной инфекции ставится, если у человека положительный результат теста на туберкулез, а медицинское обследование не указывает на заболевание туберкулезом.
  • Вы не заразны – в вашей деятельности нет ограничений.
  • Решение о лечении латентной туберкулезной инфекции будет основываться на шансах человека заболеть туберкулезом с учетом его факторов риска.
  • Лечение может быть доступно БЕСПЛАТНО в Службе здравоохранения студентов.

Диагностика активного ТБ Заразное заболевание:

  • Заболевание ТБ диагностируется на основании анамнеза, медицинского осмотра, рентгенографии органов грудной клетки и других лабораторных исследований.
  • Заболевание туберкулезом следует подозревать у лиц, у которых есть любой из следующих симптомов:

    • Необъяснимая потеря веса
    • Потеря аппетита
    • Ночные толстовки
    • Лихорадка
    • Усталость
  • Если туберкулез поражает легкие, симптомы могут включать:

    • Кашель более 3 недель
    • Кровохарканье (кашель с кровью)
    • Боль в груди
  • Департамент здравоохранения штата Нью-Джерси будет уведомлен в соответствии с требованиями закона, и вас направят на лечение за пределы кампуса.
Разное

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован.